本发明提供一种通用型动物疫病抗体检测免疫层析方法与应用，采用免疫层析试纸结合抗原生物素探针的方法对动物疫病抗体进行检测；所述免疫层析试纸包括支撑层、从测试端依次固定在支撑层上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜及手柄端的吸水垫；所述硝酸纤维素膜层上依次设置有检测线和质控线；所述结合垫采用吸附有胶体金标记的SPA或二抗IgG的玻璃纤维棉制成；所述检测线喷涂有链霉亲和素；所述质控线喷涂有非检测对象种属的IgG抗体；所述抗原生物素探针为动物疫病靶标物抗原与生物素偶联获得抗原生物素探针。可用于一种/几种动物种属的绝大多数疫病抗体的检测。