本发明提供了一种抗原蛋白冻干小球，包括冻干保护溶液和抗原蛋白溶液，所述抗原蛋白冻干小球由所述冻干保护溶液与所述抗原蛋白溶液混合后冻干获得，且所述冻干保护溶液与所述抗原蛋白溶液的体积比例为5:1‑9:1，所述抗原蛋白冻干小球的形状为球体状结构，使得抗原蛋白冻干小球可与受试样本直接混合使用，避免了液态因取样偏差，导致的检测结果的偏差，而且抗原蛋白冻干小球呈小球形态，与管壁不粘连，可实现转移，尤其是多个不同抗原蛋白的混合使用时，可根据实际需求快速进行组合使用，同时小球形态更利于运输与保存。本发明还提供了一种抗原蛋白冻干小球的制备方法，制备工艺简单方便，且确保了制得球状的原蛋白冻干小球，提升了稳定性和保存寿命。