一种稳转表达CD16跨膜蛋白细胞系的构建方法及应用

    公开(公告)号:CN118222630A

    公开(公告)日:2024-06-21

    申请号:CN202410642459.5

    申请日:2024-05-23

    IPC分类号: C12N15/85 C12N15/12 C12N5/10

    摘要: 本发明提供一种稳转表达CD16跨膜蛋白细胞系的构建方法及应用,成功构建得到稳定表达CD16的人胚肾293细胞Homo sapiens,同时所述构建方法中,包括一种得到瞬时转染率高的细胞的方法和一种加压筛选稳定表达蛋白的方法,通过使用PEI转染方式,将质粒转染进HEK293F悬浮细胞,细胞通过内吞方式吸收转染复合物,然后在细胞膜上表达外源蛋白,并添加抗生素增加压力,使细胞稳定表达膜蛋白CD16,同时转染率均可达到接近100%,且所述细胞系可稳定传代7代。

    一种用于制备冻干小球的保护剂及其应用

    公开(公告)号:CN118091117A

    公开(公告)日:2024-05-28

    申请号:CN202410502563.4

    申请日:2024-04-25

    摘要: 本发明公开了一种用于制备冻干小球的保护剂及其应用,属于流式细胞检测技术领域。所述保护剂利用0.1M~1M缓冲液配制,包括5%w/v聚乙二醇、4%w/v明胶、7.5%w/v蔗糖、1%w/v牛血清蛋白、0.25%w/v羟丙基‑β‑环糊精和0.01%~0.05%v/v防腐剂。利用本发明的保护剂制备包含荧光抗体和荧光微球的冻干小球,可以避免液态取液误差,导致的检测结果的偏差;而且小球也不会与容器内壁粘连,避免粉末状冻干品复溶不完全,混合不均匀的情况;并且可以快速、简便的检测出淋巴亚群的百分比以及细胞数量。

    用于血样PD-1检测的质控品及其制备与质控方法

    公开(公告)号:CN117705541B

    公开(公告)日:2024-04-26

    申请号:CN202410160962.7

    申请日:2024-02-05

    摘要: 本发明提供了用于血样PD‑1检测的质控品及其制备与质控方法。选取葡萄球菌溶血素提取血样中的白细胞,在含有水溶性淀粉、菊粉的冻干保护液中冻干,制备方法简单,对血液中的白细胞损伤少,有较好的分群效果,在保证数据的可信度的同时也极大降低成本;提取白细胞步骤中选择溶血的方案,冻干过程中添加本发明研发的对白细胞和PD‑1蛋白起到特定保护作用的冻干保护液,质控方法的复溶步骤中添加一种全新的复溶液,含有聚乙烯吡咯烷酮,上述措施能保持稳定的细胞形态,细胞分群效果好;对血样选取高低值两种,较为严格的血样要求可最大化的缩小不同机型间检测相同样本PD‑1表达水平的差异。

    一种重组蛋白的编码基因、载体、细胞及制备方法

    公开(公告)号:CN116970631A

    公开(公告)日:2023-10-31

    申请号:CN202311203251.5

    申请日:2023-09-19

    IPC分类号: C12N15/62

    摘要: 本发明公开了一种重组蛋白的编码基因、载体、细胞及制备方法,属于重组蛋白技术领域。所述重组蛋白为IL‑12 P70重组蛋白,所述编码基因依次包括以下序列:P40亚基的核苷酸序列、Furin识别位点的核苷酸序列、2A肽的核苷酸序列以及P35亚基的核苷酸序列,或者P35亚基的核苷酸序列、Furin识别位点的核苷酸序列、2A肽的核苷酸序列以及P40亚基的核苷酸序列。本发明将2A肽运用于IL‑12 P70重组蛋白的表达上,进一步通过2A肽的选择及与Furin识别位点结合,使得两个亚基切割效率高,表达比例平衡为1:1。利用本发明制备重组蛋白,表达产量高,抗原活性强,能够用于制备抗体,具有非常大的应用价值。

    抗原蛋白冻干小球及其制备方法

    公开(公告)号:CN114159555A

    公开(公告)日:2022-03-11

    申请号:CN202111495288.0

    申请日:2021-12-08

    摘要: 本发明提供了一种抗原蛋白冻干小球,包括冻干保护溶液和抗原蛋白溶液,所述抗原蛋白冻干小球由所述冻干保护溶液与所述抗原蛋白溶液混合后冻干获得,且所述冻干保护溶液与所述抗原蛋白溶液的体积比例为5:1‑9:1,所述抗原蛋白冻干小球的形状为球体状结构,使得抗原蛋白冻干小球可与受试样本直接混合使用,避免了液态因取样偏差,导致的检测结果的偏差,而且抗原蛋白冻干小球呈小球形态,与管壁不粘连,可实现转移,尤其是多个不同抗原蛋白的混合使用时,可根据实际需求快速进行组合使用,同时小球形态更利于运输与保存。本发明还提供了一种抗原蛋白冻干小球的制备方法,制备工艺简单方便,且确保了制得球状的原蛋白冻干小球,提升了稳定性和保存寿命。

    一种重组蛋白的编码基因、载体、细胞及制备方法

    公开(公告)号:CN116970631B

    公开(公告)日:2024-01-05

    申请号:CN202311203251.5

    申请日:2023-09-19

    IPC分类号: C12N15/62

    摘要: 本发明公开了一种重组蛋白的编码基因、载体、细胞及制备方法,属于重组蛋白技术领域。所述重组蛋白为IL‑12 P70重组蛋白,所述编码基因依次包括以下序列:P40亚基的核苷酸序列、Furin识别位点的核苷酸序列、2A肽的核苷酸序列以及P35亚基的核苷酸序列,或者P35亚基的核苷酸序列、Furin识别位点的核苷酸序列、2A肽的核苷酸序列以及P40亚基的核苷酸序列。本发明将2A肽运用于IL‑12 P70重组蛋白的表达上,进一步通过2A肽的选择及与Furin识别位点结合,使得两个亚基切割效率高,表达比例平衡为1:1。利用本发明制备重组蛋白,表达产量高,抗原活

    甘露聚糖的制备方法与甘露聚糖

    公开(公告)号:CN115043954A

    公开(公告)日:2022-09-13

    申请号:CN202210738877.5

    申请日:2022-06-27

    IPC分类号: C08B37/00

    摘要: 本发明提供一种甘露聚糖及其制备方法,所述制备方法包括步骤:S1:对灭菌后的念珠菌的菌液离心后保留第一上清液;S2:在所述第一上清液中加入无水乙醇,离心后弃去上清,得到甘露聚糖粗提物;S3:将所述甘露聚糖粗提物溶于去离子水后加入十六烷基三甲基溴化铵,离心弃去沉淀,得到第二上清液;S4:调节所述第二上清液的pH至碱性后离心,在所得沉淀中加入酸性溶液,在得到的第一混合物中加入无水乙醇,离心后弃去上清,得到第二沉淀;S5:在所述第二沉淀中依次加入去离子水和由氯仿和醇组成的有机混合液,离心后弃去沉淀,得到多糖溶液;S6:对所述多糖溶液依次进行层析和浓缩,得到甘露聚糖纯品。本发明制备的甘露聚糖纯度较高。

    抗体检测试剂盒以及在免疫分析方面的应用

    公开(公告)号:CN111537735A

    公开(公告)日:2020-08-14

    申请号:CN202010413123.3

    申请日:2020-05-15

    发明人: 熊霞 熊顺强

    摘要: 本发明提供了一种抗体检测试剂盒,包括程序性死亡受体1的抗体以及至少三种簇分化抗原的抗体。所述程序性死亡受体1的抗体以及每种簇分化抗原的抗体携带有不同的荧光素,所述至少三种簇分化抗原包括成熟T细胞表面标记物、辅助T细胞表面标记物和细胞毒T细胞表面标记物,能够用于快速考察PD-1蛋白的表达情况,且所述程序性死亡受体1的抗体所携带的荧光素的染色指数高于所述每种簇分化抗原的抗体所携带的荧光素的染色指数,有利于准确考察PD-1蛋白的表达情况。本发明还提供了所述抗体检测试剂盒在免疫分析方面的应用。