本发明公开了一种胶原蛋白源酪氨酸酶抑制肽及其制备方法与应用，该制备方法包括以下步骤:(1)鱼皮胶原的提取；(2)限制性酶解；(3)固定化铜锌离子亲和层析；(4)液相色谱‑串联质谱联用鉴定；(5)分子对接筛选。筛选出4条与酪氨酸酶螯合最为紧密的肽，这4条肽的氨基酸序列分别为FSGLD、PFRMY、RGFTGM和APGAPGGGF。采用本发明方法制备的胶原蛋白源酪氨酸酶抑制肽具有良好的酪氨酸酶抑制活性，可作为美白功能成分用于化妆品中，具有良好的应用前景。