本发明公开了一种以改性硅藻土为载体的固定化全细胞催化制备β‑烟酰胺单核苷酸的方法。将经过酸、碱处理后的改性硅藻土作为固定化载体，以分别含有多磷酸激酶(Ppk)、核酮糖‑5‑磷酸异构酶(RKI1)、磷酸核糖焦磷酸合成酶(Prps)以及烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)的菌株为对象来制备固定化细胞，再以D‑核糖、ATP、烟酰胺为原料，加入多磷酸激酶、核酮糖‑5‑磷酸异构酶、磷酸核糖焦磷酸合成酶以及烟酰胺磷酸核糖转移酶四种酶的组合用于催化反应合成β‑烟酰胺单核苷酸(β‑NMN)，转化率高。不仅提高了酶法合成β‑NMN的效率和底物转化率，而且其中的固定化细胞可以多次重复使用。