本发明公开了一种基于人工核酶的食品中污染物多色荧光分析方法，属于分子生物学检测领域。本发明以金纳米颗粒为载体，合成AuNPs‑DNA‑抗体检测探针，抗体用于捕获目标物，引物DNA用于放大信号。在最佳条件下，本发明的方法实现了CAP、17β‑E2和AFM1的同时检测，检测范围分别为0.333ng/mL‑3.333μg/mL、3.333ng/mL‑3.333μg/mL、3.333fg/mL‑3.333ng/mL，定量限分别为0.333ng/mL、3.333ng/mL、3.333fg/mL。本发明检测准确度、灵敏度和稳定性较高，相比现有技术，本发明建立的方法在检测过程中，无需添加额外的核酸外切酶，降低反应成本。