机械增强型脱细胞猪角膜后板层载体支架制备方法及应用。首先切取新鲜猪角膜后板层进行溶胀，再反复冻融利用角膜脱细胞专用溶液破碎细胞后，DNA‑RNA酶处理去除残留核酸物质，风干后浸入角膜专用交联剂溶液中进行交联，再次风干后使用电离射线进行辐照灭菌制成。所述载体支架应用于组织工程角膜内皮和角膜后板层生产，从而满足批量生产和临床应用对支架机械强度的要求。本发明适于规模化生产和临床推广应用，所制备的载体支架具有结构完整、机械强度更接近于天然角膜后板层、与人角膜内皮组织细胞有良好的生物相容性、可应用于DSAEK术式且其生产成本低等特点，满足组织工程角膜内皮和后板层生产所需大量且机械性能理想载体支架的要求。