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公开(公告)号：CN115006594B
公开(公告)日：2023-07-11
申请号：CN202210731767.6
申请日：2022-06-26
申请人： 中国海洋大学
摘要： 机械增强型脱细胞猪角膜后板层载体支架制备方法及应用。首先切取新鲜猪角膜后板层进行溶胀，再反复冻融利用角膜脱细胞专用溶液破碎细胞后，DNA‑RNA酶处理去除残留核酸物质，风干后浸入角膜专用交联剂溶液中进行交联，再次风干后使用电离射线进行辐照灭菌制成。所述载体支架应用于组织工程角膜内皮和角膜后板层生产，从而满足批量生产和临床应用对支架机械强度的要求。本发明适于规模化生产和临床推广应用，所制备的载体支架具有结构完整、机械强度更接近于天然角膜后板层、与人角膜内皮组织细胞有良好的生物相容性、可应用于DSAEK术式且其生产成本低等特点，满足组织工程角膜内皮和后板层生产所需大量且机械性能理想载体支架的要求。
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公开(公告)号：CN109439628B
公开(公告)日：2021-09-24
申请号：CN201811178859.6
申请日：2018-10-10
申请人： 中国海洋大学
IPC分类号： C12N5/079 , C12N5/0797
摘要： 本发明涉及一种角膜缘干细胞原代培养方法。其特征在于经庆大霉素溶液处理后的角膜缘组织剪碎后置于组织消化液中消化、过滤，并将滤液离心后获得的角膜缘组织细胞沉淀进行短暂冻存，再将过滤剩余的组织块（即滤渣）用角膜缘干细胞滋养层培养液重悬，接种于用包被液预处理的细胞培养板进行培养，获得角膜缘成纤维细胞，然后用丝裂霉素C溶液处理生长至对数期的角膜缘成纤维细胞，制成角膜缘干细胞滋养层，最后复苏短暂冻存的组织细胞，用角膜缘干细胞原代培养液重悬后，接种在铺有角膜缘干细胞滋养层的细胞培养板中进行原代培养即得。该角膜缘干细胞安全性高、稳定性好，完好地满足了临床治疗的高要求。
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公开(公告)号：CN111110921A
公开(公告)日：2020-05-08
申请号：CN201911333895.X
申请日：2019-12-23
申请人： 中国海洋大学
摘要： 本发明涉及一种组织工程后板层角膜的体外构建方法，包括角膜种子细胞的人角膜基质细胞和人角膜内皮细胞，与带有后弹力层的脱细胞猪角膜基质作为组织工程角膜载体支架，其特征是首先在上述支架中接种角膜基质种子细胞构建出组织工程后板层角膜的基质层部分，再在其后弹力层上接种角膜内皮种子细胞，即构建出组织结构和功能与正常后板层角膜相近的组织工程后板层角膜。本发明攻克了人角膜内皮细胞在体外无法增殖的国际难题，角膜内皮细胞形成密度极高、连接紧密的单层内皮结构高达3400-3600个细胞/mm2；接种角膜基质细胞采用注射接种法，既大大缩短了体外培养时间，又能保持载体支架结构的完整性。因此可满足高质量需求和低成本实现批量生产而得以推广应用。
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公开(公告)号：CN101508732B
公开(公告)日：2012-02-22
申请号：CN200910020033.1
申请日：2009-03-23
申请人： 中国海洋大学
IPC分类号： C07K14/805
摘要： 本发明涉及一种从毛蚶中分离纯化血红蛋白的方法，首先用注射器插入新鲜毛蚶鳃部取血，离心收集血细胞沉淀，然后用Hepes缓冲液悬浮后，在-80℃和4℃反复冻融破碎细胞，离心收集上清液，4℃离心浓缩至0.5毫升，上样于Superdex200凝胶过滤柱，0.5毫升/分洗脱，1毫升/管收集洗脱组分，检测并收集具有波长415nm高吸收值的洗脱组分，4℃离心浓缩至0.5毫升，继续上样于SephacrylS-100凝胶过滤柱，0.5毫升/分洗脱，1毫升/管收集洗脱组分，最后检测并收集具有波长415nm最高吸收值的洗脱组分，即为毛蚶血红蛋白纯化样品。本发明方法简便、重复性好且血红蛋白的得率高，所纯化血红蛋白仍保持有四级结构和天然活性，便于进行多重生物学功能研究。
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公开(公告)号：CN101508971A
公开(公告)日：2009-08-19
申请号：CN200910020034.6
申请日：2009-03-23
申请人： 中国海洋大学
CPC分类号： C12N5/0621 , A61L27/3604 , A61L27/3808 , A61L27/3839 , A61L2430/16
摘要： 本发明涉及一种组织工程人角膜内皮的重建方法，是利用20％小牛血清－DMEM/F12培养液将角膜内皮细胞体外培养至对数生长期，采用胰蛋白酶消化获得完全脱上皮层的羊膜载体支架，平铺在培养板孔中牢固干贴后，将悬浮于含有IV型胶原蛋白和20％小牛血清的DMEM/F12培养液的对数生长期人角膜内皮细胞，接种至在平铺有羊膜载体支架的培养板孔中启动体外培养，进行组织工程人角膜内皮的体外重建。本发明工艺科学合理，所重建的组织工程人角膜内皮可用于批量生产，满足角膜内皮盲临床角膜移植治疗对组织工程人角膜内皮的大量需求，且组织工程人角膜内皮体外重建和临床治疗的成本低。
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公开(公告)号：CN1313479C
公开(公告)日：2007-05-02
申请号：CN200510044122.1
申请日：2005-07-17
申请人： 中国海洋大学
IPC分类号： C07J63/00
摘要： 一种利用海参加工废液制备海参皂甙的工艺方法，首先将海参废液进行过滤，然后滤液用乙醇沉淀，静置，离心，再将离心上清液减压浓缩去除乙醇成分，得浓缩液，以1.5～2.0BV/h的流速通过大孔吸附树脂柱，而后用水以同样的流速洗脱以去除其中的盐分、糖类、色素等杂质成分，接着用60～70%乙醇洗脱被吸附在大孔吸附树脂上的海参皂甙成分，收集洗脱液减压浓缩至浸膏状，冷冻干燥为海参皂甙干品。该工艺的主要特点是能充分利用海参加工后的废弃液，变废为宝，使分离的皂甙保存完好的结构和有效的生物活性；而且操作简单，生产周期短，生产成本低，对环境无污染，产品具有极高的利用价值。
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公开(公告)号：CN1749393A
公开(公告)日：2006-03-22
申请号：CN200510044143.3
申请日：2005-07-27
申请人： 中国海洋大学
IPC分类号： C12N5/08
摘要： 一种人角膜内皮细胞系的构建方法，它是以角膜内皮为材料，先将角膜内皮面朝下进行贴板培养，采用时间梯度连续贴膜法获得纯净角膜内皮细胞，在含20％胎牛血清、硫酸软骨素氧化降解物、表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、牛眼生素的DMEM/F12培养液中培养；采用胰蛋白酶消化法进行传代培养。该技术工艺科学合理，经这种方法所获得的传代细胞目前已传至第106代。本发明的角膜内皮细胞未经任何病毒或癌基因转染，因此获得的人角膜内皮细胞没有任何致瘤性，可望直接用于人工角膜生产和临床应用。
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公开(公告)号：CN1733793A
公开(公告)日：2006-02-15
申请号：CN200510044122.1
申请日：2005-07-17
申请人： 中国海洋大学
IPC分类号： C07J63/00
摘要： 一种利用海参加工废液制备海参皂甙的工艺方法，首先将海参废液进行过滤，然后滤液用乙醇沉淀，静置，离心，再将离心上清液减压浓缩去除乙醇成分，得浓缩液，以1.5～2.0BV/h的流速通过大孔吸附树脂柱，而后用水以同样的流速洗脱以去除其中的盐分、糖类、色素等杂质成分，接着用60～70％乙醇洗脱被吸附在大孔吸附树脂上的海参皂甙成分，收集洗脱液减压浓缩至浸膏状，冷冻干燥为海参皂甙干品。该工艺的主要特点是能充分利用海参加工后的废弃液，变废为宝，使分离的皂甙保存完好的结构和有效的生物活性；而且操作简单，生产周期短，生产成本低，对环境无污染，产品具有极高的利用价值。
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公开(公告)号：CN1582773A
公开(公告)日：2005-02-23
申请号：CN200410024146.6
申请日：2004-05-26
申请人： 中国海洋大学
摘要： 一种用鲜海参生产冻干海参粉的方法，先将新鲜海参剖腹去肠制成皮参后，预冷，然后转移至－20℃以下的冷库进行冷冻12小时以上得冰皮参；把冰皮参加水升温煮熟，捞出先后放入微碱和醋酸水溶液中并在水浴温度为40℃－45℃下进行发制，再放入离子水或蒸馏水中在0－4℃下发制至海参重量恒重取出，将发制好的海参打浆，取其均浆液研磨至粉粒度，把研磨液分盘在0℃－5℃冷库预冷后进行深冷冻，再将冻好的样品装到冻干机真空冷冻，在温度降到－54℃以下，进行真空冻干至样品达到恒重，将干粉取出、粉粹后密封包装。可保持新鲜海参原有的色香味，复水率达90％以上，复水时间短，营养成分损失少，食用方便，含水量低，重量轻，保存期长。
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公开(公告)号：CN1582690A
公开(公告)日：2005-02-23
申请号：CN200410024165.9
申请日：2004-05-27
申请人： 中国海洋大学
摘要： 一种生产海参豆奶粉的制备工艺，先将大豆清理烘干，去皮粉碎后，将其膨化成豆奶粉；将新鲜海参剖腹去肠形成皮参，皮参经碱发制后，用酸处理去腥涩味，然后用胶体磨研浆，冷冻干燥成冻干海参粉；最后，将冻干海参粉与膨化豆奶粉按比例混合，即成为海参豆奶粉。所述混合比例中干海参粉占其重量比为0.5－1％。本发明是利用大豆为原料，添加通过冷冻干燥技术生产的海参粉，进行复合深加工，生产海参豆奶粉；产品营养全面，将兼有动、植物营养，兼有陆地植物和海洋生物保健功效，高蛋白，低糖度，低胆固醇，适合各种人群食用；产品无腥味，用开水冲泡即可饮用。
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