本发明公开了一种强化型M‑MLV逆转录酶突变体及其应用，属于生物技术领域。所述M‑MLV逆转录酶突变体是在野生型莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶基础上经人工改造而成，氨基酸序列如Seq ID No.2所示。强化型M‑MLV逆转录酶具备高扩增效率、强抗抑制能力和热稳定性，耐热能力可达到70℃，反应灵敏度高、反应时间快，能够排除RNA样品中所混有的高浓度乙醇或异丙醇的干扰，实现RNA的逆转录。所述增强型逆转录酶突变体可应用于微量病毒RNA逆转录和检测，普通及长链cDNA的快速合成，多种转录组建库等领域，具有广泛的应用前景和市场价值。