本发明属于生物传感器技术领域，公开了一种可检测牛奶中卡那霉素（KAN）的比率型电化学适配体传感器制备及使用方法。本发明制备的比率型电化学适配体传感器基于二茂铁（Fc）标记引物和石墨炔‑亚甲蓝（GDY‑MB）纳米复合材料。GDY‑MB纳米复合材料修饰在电极上会产生MB电信号，设计5'端标记Fc的引物可以与适配体杂交形成互补双链，当KAN与适配体特异性结合后会释放出游离引物形成发夹结构，导致Fc接近电极表面引起Fc电信号增强。引入核酸外切酶I（Exo I）切割单链适配体以达到目标物循环扩增放大信号作用。引物3'端进行磷酸化修饰以保护发夹结构不被Exo I切割。进一步修饰壳聚糖‑氧化锡锑（CS‑ATO）和AuNPs起到双重信号放大作用，实现了卡那霉素的高灵敏检测。