本发明公开高效转化葡萄糖生产四氢嘧啶重组菌的构建方法及应用，重组菌是根据四氢嘧啶的生物合成途径，平衡磷酸烯醇式丙酮酸到草酰乙酸和丙酮酸的碳代谢流分配构建出的以葡萄糖为底物直接发酵生产四氢嘧啶的重组菌株，在常规发酵条件下，56小时发酵液中能够积累36‑53g/L四氢嘧啶，单位细胞的产率达到1.21‑1.91g/g DCW，葡萄糖摩尔转化率达到0.31‑0.38mol/mol，产量、产率和转化率均高于现有工艺；本发明提供的重组菌用于发酵产四氢嘧啶的过程控制与现有的发酵法和全细胞催化法生产四氢嘧啶盐工艺相比，原料成本较低，培养条件简单，设备损耗小，发酵周期短，操作简便，无需收集菌体提取酶液，四氢嘧啶生产效率较高。