本发明公开了一种多通道光片照明显微成像装置，图像采集模块包括有多个图像探测器；激光器组发射多路不同波长的激发光、后通过光路模块合束为一束入射光经过扫描振镜和成像模块后照射到载物台中的样品上，载物台安装在三维位移平台上；成像模块内的成像物镜收集样品内的荧光信号、后经过所述分光模块形成多个不同波段的荧光信号投射到多个图像探测器中。每个图像探测器均形成一个图像成像通道，多个图像成像通道接收多个不同波段的荧光信号并传输至相应的图像探测器，三维位移平台实现样品切片的三维位移运动，通过采用样品切片连续运动成像和多个图像探测器同时检测采集荧光信号的策略，可减少样品制备与成像的时间间隔以及成像中的停顿。