本发明涉及生物疫苗和微生物的检测与诊断技术领域，尤其是涉及一种TAMV核蛋白多抗原表位串联重组蛋白及其应用。本发明通过改良生物合成肽法筛选鉴定NP的B细胞抗原精细表位，通过柔性片段串联多抗原表位并多拷贝(NP‑MEPX4)，利用原核表达系统表达r‑NP‑MEPX4重组蛋白，并通过镍柱法纯化重组蛋白，建立基于r‑NP‑MEPX4蛋白的TAMV间接ELISA方法。本发明建立的间接ELISA方法能有效检出TAMV阳性血清，具有高灵敏性、特异性和准确性，可用于蜱媒TAMV血清学检测。因此，本发明提供的基于TAMV r‑NP‑MEPX4蛋白包被的抗体间接ELISA检测方法适合临床大样本的检测，适合大规模推广，也为TAMV的早期预警和综合防控提供了有力工具。