本发明公开了一种用于抗生素增效的超支化聚赖氨酸的制备方法。该超支化聚赖氨酸是按照包括下述步骤的方法制备得到的：将L‑赖氨酸盐酸盐与碱混合均匀，在负压条件下进行超支化赖氨酸的聚合反应，得到超支化聚赖氨酸。本发明提供的超支化聚赖氨酸为赖氨酸盐酸盐通过化学法合成的聚赖氨酸高纯度组合物，用于处理人或动物的食源/饲料源致病菌，增加细胞膜通透性，降低粘杆菌素使用，减少细菌感染。该超支化聚赖氨酸对所有测试的革兰氏阴性病原菌都具有协同增效粘杆菌素抗菌活性的能力，将大大有利于细菌感染的治疗。