本发明公开了产2'‑岩藻糖基乳糖的重组大肠杆菌及其构建方法与应用。该重组大肠杆菌为下述任一种：1)含有α‑1,2‑岩藻糖基转移酶和L‑岩藻糖激酶/GDP‑L‑岩藻糖焦磷酸化酶基因；2)含有1)的基因，不含有β‑半乳糖苷酶基因、UDP‑葡萄糖脂质载体转移酶基因、岩藻糖异构酶基因、墨角藻糖激酶基因、阿拉伯糖异构酶基因和鼠李糖异构酶基因中的至少一种；3)除具有2)的特征外，还含有岩藻糖转运蛋白基因和/或乳糖通透酶基因；4)除具有3)的特征外，不含有外膜脂质合成和修饰相关的基因；5)除具有4)的特征外，不含有外膜脂多糖合成、修饰和/或转运相关的基因。该重组大肠杆菌可用于工业化生产2'‑岩藻糖基乳糖。