本发明公开了一种在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶及其制备方法，涉及多肽水凝胶制备技术领域，其制备方法包括以下步骤：(1)在多肽两端分别修饰上巯基与马来酰亚胺的点击反应活性基团，得杂化多肽分子；配置成水溶液，得α‑螺旋平行二聚体水溶液；(2)加入三(2‑羧乙基)膦盐酸盐，混匀得混合溶液；然后在室温下聚合反应，得刚性聚合物溶液；(3)调节pH值，在室温下静置或注射到体内，得水凝胶。本发明的水凝胶具有pH响应、机械强度可调节、通过液体形态进行注射、并在生理环境中能快速原位形成水凝胶等特点，有效解决了现有可注射水凝胶技术中水凝胶机械强度低、生物安全性差以及水凝胶与受损组织粘合力较差等问题。