本发明提供一种检测DHA调配油中Sn‑2位DHA含量的方法，包括：对待测样品进行预处理；对预处理后的样品，进行水解和分离得到DHA油脂；检测所述DHA油脂中Sn‑2位DHA的含量；所述水解包括：针对预处理后的样品，采用胰脂肪酶进行水解；所述胰脂肪酶的用量至少为2000mg/(1g预处理后的样品)，水解的时间至少为10分钟。本发明提供一种检测Sn‑2位DHA含量的方法，通过提高水解过程的水解程度，可以有效提高检测DHA油脂中Sn‑2位DHA的准确性，尤其是DHA调配油中Sn‑2位DHA的准确性，这对于DHA油脂产品的品质把控及脂肪酸分析具有重要意义。