本发明公开了NbPSK3基因在烟草抗芜菁花叶病毒中的应用，涉及基因工程技术领域，所述NbPSK3基因序列如SEQ ID NO：1所示。本发明利用NbPSK3基因序列信息扩增该基因，并构建过表达载体和沉默载体，发现过表达NbPSK3基因可以显著增强本氏烟对TuMV的抗性，沉默NbPSK3基因则利于TuMV侵染，说明NbPSK3基因与烟草芜菁花叶病毒的抗性高度相关。本发明为芜菁花叶病毒抗性的分子机制研究、新的抗芜菁花叶病毒烟草新品种培育奠定了应用基础，同时也为新的抗病毒基因筛选及抗性植物培育提供了新的借鉴和参考。