本发明涉及一种人胃内因子蛋白的表达方法及应用，表达方法步骤为：S1：选用上游引物和下游引物，以已保存有IF基因片段的T载体重组质粒为模板，通过PCR反应扩增IF目的基因；S2：将IF基因片段克隆到表达载体pCDNA3.1(+)上，构建IF基因的表达载体pCDNA3.1(+)‑IF；S3：将表达载体pCDNA3.1(+)‑IF转染至HEK293细胞株：用去内毒素试剂盒抽提质粒，将表达载体pCDNA3.1(+)‑IF线性化后转染至HEK293细胞中；再筛选出单克隆扩大培养；S4确验证并确定重组表达IF蛋白是否成功表达，再纯化表达成功的重组表达IF蛋白并测试蛋白活性。获得的重组IF蛋白的活性高。