本发明涉及一种用于延缓间充质干细胞衰老的小分子RNA及其应用。所述小分子RNA为tRF‑1:32‑Gly‑GCC‑1、tRF‑1:32‑Glu‑CTC‑1‑M2、tRF‑1:29‑Gly‑CCC‑1‑M4，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1~3所示。本发明首次发现tRF‑1:32‑Gly‑GCC‑1、tRF‑1:32‑Glu‑CTC‑1‑M2、tRF‑1:29‑Gly‑CCC‑1‑M4具有延缓间充质干细胞衰老的功能，本发明的验证实验均表明了以上小分子RNA（tRF‑1:32‑Gly‑GCC‑1、tRF‑1:32‑Glu‑CTC‑1‑M2、tRF‑1:29‑Gly‑CCC‑1‑M4）能够提高衰老间充质干细胞的增殖能力，降低衰老间充质干细胞的活性氧水平，进而延缓间充质干细胞衰老，可以用于制备治疗间充质干细胞衰老引起的相关疾病的药物，为治疗间充质干细胞衰老相关疾病药物的临床治疗和发展提供了新方法和新思路。