本发明公开了一种克服新城疫母源抗体影响的重组新城疫病毒载体及应用，涉及兽用生物制品技术领域。本发明利用已建立的新城疫病毒LaSota株反向遗传操作平台，将融合蛋白(F)和血凝素‑神经氨酸酶蛋白(HN)的中和表位突变后，所得重组载体转染BSR‑T7/5细胞系，得重组病毒载体。本发明所提供的重组新城疫病毒载体LS/EM株在鸡胚上具有较高的繁殖滴度，具有低致病性的分子特征，且不被新城疫阳性血清中和，因此能在新城疫高母源抗体水平的鸡体内有效复制，可作候选疫苗载体，有效解决了新城疫母源抗体影响疫苗保护效果的问题。