本发明涉及生物技术领域，具体公开了一株全悬浮无血清型ST细胞及其驯化方法与应用。本发明方法包括：将待驯化ST细胞先以含丙酮酸钠和胎牛血清的DMEM培养基培养，之后以逐渐降低胎牛血清含量的培养基进行降血清驯化培养，获得待悬浮驯化ST细胞；将其以无血清培养基进行连续传代悬浮驯化培养；若出现了5～8个以上的ST细胞结为一团并且ST细胞出现挂壁情况时，则添加硫酸葡聚糖钠盐并提高培养转速；若情况无改善，则以胰酶对结团细胞进行多次消化；若存在不易消化的细胞团，则采用过细胞筛的方法进行处理。本发明驯化后的ST悬浮细胞可应用于猪丁型冠状病毒的培养和后续疫苗的制备。