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公开(公告)号：CN119846216A
公开(公告)日：2025-04-18
申请号：CN202411791136.9
申请日：2024-12-06
Applicant: 金宇保灵生物药品有限公司
IPC: G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/53
Abstract: 本发明涉及病毒检测技术领域，尤其涉及一种猪急性腹泻综合症冠状病毒中和抗体的检测方法。所述检测方法包括：中和反应、细胞吸附、清洗细胞、细胞培养和抗体效价检测；所述清洗包括：在所述细胞吸附进行1~2小时之后，弃去上清液，清洗细胞。本发明研究发现，在病毒吸附细胞的阶段，血清会对病毒稀释液中的胰酶有中和作用而使得细胞病变受到抑制，因而提出在细胞吸附阶段之后通过清洗排除血清和胰酶作用对于细胞病变的影响，这可以显著降低猪急性腹泻综合症冠状病毒中和抗体的检测限，提高检测准确率。
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公开(公告)号：CN119530179A
公开(公告)日：2025-02-28
申请号：CN202411454662.6
申请日：2024-10-17
Applicant: 金宇保灵生物药品有限公司
Abstract: 本发明涉及病毒纯化浓缩技术领域，具体涉及一种牛副流感病毒3型的纯化浓缩方法。本发明提供的牛副流感病毒3型的纯化浓缩方法包括：将病毒液采用中空纤维柱进行纯化浓缩；所述纯化浓缩包括三次洗滤，三次洗滤使用的洗滤液体积依次递减，其中，第一次洗滤使用的洗滤液体积为浓缩体积的5‑10倍，第二次洗滤使用的洗滤液体积为浓缩体积的2‑5倍，第三次洗滤使用的洗滤液体积为浓缩体积的1‑2倍。该方法针对悬浮培养的牛副流感病毒3型病毒液，能够有效去除杂蛋白的，且具有较高的病毒回收率，能够显著提高病毒液的毒价，制得浓缩病毒液的杂蛋白含量大幅度降低，同时与三次大体积洗滤相比，可有效节省洗滤时间，具有较好的应用前景。
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公开(公告)号：CN117802032A
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202311522379.8
申请日：2023-11-15
Applicant: 金宇保灵生物药品有限公司
Inventor： 陈坚 , 俎红丽 , 蔺建平 , 吉格木德 , 齐志涛 , 孙慧 , 王娥娥 , 任健孚 , 李欣 , 吴梦甜 , 宋志刚 , 李超 , 李晓艳 , 杨青春 , 贺瑶 , 辛俊利 , 王岩 , 王秉昆 , 王华 , 赵丽霞 , 李劼 , 赵明治 , 关平原
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体公开了一株全悬浮无血清型ST细胞及其驯化方法与应用。本发明方法包括：将待驯化ST细胞先以含丙酮酸钠和胎牛血清的DMEM培养基培养，之后以逐渐降低胎牛血清含量的培养基进行降血清驯化培养，获得待悬浮驯化ST细胞；将其以无血清培养基进行连续传代悬浮驯化培养；若出现了5～8个以上的ST细胞结为一团并且ST细胞出现挂壁情况时，则添加硫酸葡聚糖钠盐并提高培养转速；若情况无改善，则以胰酶对结团细胞进行多次消化；若存在不易消化的细胞团，则采用过细胞筛的方法进行处理。本发明驯化后的ST悬浮细胞可应用于猪丁型冠状病毒的培养和后续疫苗的制备。
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公开(公告)号：CN117264873A
公开(公告)日：2023-12-22
申请号：CN202311233637.0
申请日：2023-09-22
Applicant: 金宇保灵生物药品有限公司
Inventor： 俎红丽 , 武瑾贤 , 谢雪岑 , 郝鹏 , 蔺建平 , 王子涵 , 孙慧 , 王娥娥 , 任健孚 , 齐志涛 , 宋志刚 , 李超 , 李晓艳 , 杨青春 , 贺瑶 , 辛俊利 , 王岩 , 王秉昆 , 吉格木德 , 刘瑞明 , 乔煜婷 , 王华 , 陈坚 , 赵明治 , 关平原
Abstract: 本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种Marc145细胞的悬浮驯化方法及应用。悬浮驯化方法包括：采用293Pro 293S无血清培养基和Tac‑S101BHK细胞无血清培养基的混合培养基培养Marc145细胞。本发明的Marc145细胞的悬浮驯化方法，能够使得Marc145贴壁细胞成功实现悬浮驯化，Marc145悬浮细胞生长速度快，细胞生长状态稳定，细胞分散好，大小均一，Marc145悬浮细胞对猪蓝耳病毒(PRRSV)敏感性高，能够稳定产毒，适合对猪蓝耳病毒进行大规模生产，为猪蓝耳病毒疫苗的研发提供了基础。
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公开(公告)号：CN116769697A
公开(公告)日：2023-09-19
申请号：CN202310749406.9
申请日：2023-06-25
Applicant: 金宇保灵生物药品有限公司
Inventor： 俎红丽 , 蔺建平 , 陈坚 , 赵明治 , 赵丽霞 , 关平原 , 谢雪岑 , 孙慧 , 王娥娥 , 任健孚 , 杨青春 , 宋志刚 , 王秉昆 , 李超 , 齐志涛 , 李晓艳 , 贺瑶 , 吉格木德 , 张建宏 , 王华
IPC: C12N5/071 , C12N7/00 , C12N5/02 , A61K39/215 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了一种适合无血清全悬浮的SIEC‑S细胞及培养驯化方法，属于SIEC‑S细胞培养技术领域，SIEC‑S细胞于2022年12月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.45338，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为猪小肠粘膜上皮悬浮细胞；SIEC‑S细胞直接在无血清的CD培养基中生长，减少了血清的使用量，降低了成本，SIEC‑S可在生物反应器上悬浮大规模培养，提高了下游疫苗抗原含量的得率。
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公开(公告)号：CN117802128A
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202410003551.7
申请日：2024-01-02
Applicant: 金宇保灵生物药品有限公司
Abstract: 本发明涉及生物基因表达技术领域，尤其涉及一种提高E2蛋白表达量的重组基因及应用。本发明所述重组基因由信号肽的基因序列与E2蛋白的基因序列顺次连接得到，其中，所述E2蛋白的基因序列经密码子优化，可在重组细胞中高效表达。另外，本发明提供的重组基因引入了信号肽序列，所述信号肽序列与密码子优化后的E2蛋白基因序列连接后，E2蛋白的表达量显著提升。
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公开(公告)号：CN117305393B
公开(公告)日：2024-02-27
申请号：CN202311597272.X
申请日：2023-11-28
Applicant: 金宇保灵生物药品有限公司
Abstract: 本发明涉及兽用疫苗及微生物细胞培养技术领域，尤其涉及一种提高CSFV‑E2蛋白表达量的培养基的应用。本发明所述提高CSFV‑E2蛋白表达量的培养基，以CD CHO 011为基础培养基，添加8‑12mM的L‑精氨酸。该培养基能极大程度地提升细胞活率和培养后期的活细胞数量，提高CSFV‑E2蛋白的表达量。本发明在使用前述培养基发酵生产CSFV‑E2蛋白的过程中，添加CD Feed 002营养补充剂，有助于降低因前期添加L‑精氨酸导致的细胞代谢产物积聚，进而减少代谢产物对细胞后期生长和蛋白表达造成的不利影响。
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公开(公告)号：CN117305393A
公开(公告)日：2023-12-29
申请号：CN202311597272.X
申请日：2023-11-28
Applicant: 金宇保灵生物药品有限公司
Abstract: 本发明涉及兽用疫苗及微生物细胞培养技术领域，尤其涉及一种提高CSFV‑E2蛋白表达量的培养基的应用。本发明所述提高CSFV‑E2蛋白表达量的培养基，以CD CHO 011为基础培养基，添加8‑12mM的L‑精氨酸。该培养基能极大程度地提升细胞活率和培养后期的活细胞数量，提高CSFV‑E2蛋白的表达量。本发明在使用前述培养基发酵生产CSFV‑E2蛋白的过程中，添加CD Feed 002营养补充剂，有助于降低因前期添加L‑精氨酸导致的细胞代谢产物积聚，进而减少代谢产物对细胞后期生长和蛋白表达造成的不利影响。
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公开(公告)号：CN113406337B
公开(公告)日：2024-05-14
申请号：CN202110697711.9
申请日：2021-06-23
Applicant: 金宇保灵生物药品有限公司
IPC: G01N33/68 , G01N33/577 , C12N5/071
Abstract: 本发明公开一种能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc‑145细胞株的筛选方法，属于生物工程技术领域。本发明提供的方法包括利用间接免疫荧光法检测由候选Marc‑145单克隆细胞株繁殖形成的Marc‑145单克隆细胞群中细胞表面存在CD163受体的细胞占Marc‑145细胞群的百分比，再根据该百分比筛选出能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc‑145细胞株，具有快速、方便、客观、准确的优势，还能够基于此预测由Marc‑145细胞群培养PRRSV获得的病毒液中病毒含量，可以指导疫苗生产。
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公开(公告)号：CN113406337A
公开(公告)日：2021-09-17
申请号：CN202110697711.9
申请日：2021-06-23
Applicant: 金宇保灵生物药品有限公司
IPC: G01N33/68 , G01N33/577 , C12N5/071
Abstract: 本发明公开一种能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc‑145细胞株的筛选方法，属于生物工程技术领域。本发明提供的方法包括利用间接免疫荧光法检测由候选Marc‑145单克隆细胞株繁殖形成的Marc‑145单克隆细胞群中细胞表面存在CD163受体的细胞占Marc‑145细胞群的百分比，再根据该百分比筛选出能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc‑145细胞株，具有快速、方便、客观、准确的优势，还能够基于此预测由Marc‑145细胞群培养PRRSV获得的病毒液中病毒含量，可以指导疫苗生产。
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