本发明涉及药物合成技术领域，具体而言，涉及形成L‑异亮氨酸‑L‑苏氨酸(叔丁酯)‑L‑天冬氨酸(叔丁酯)‑叔丁酯的合成方法。该方法包括：将保护基‑叔丁基‑L‑苏氨酸盐、TBTU、HOBT、碱性物质和L‑天门冬氨酸二叔丁酯盐酸盐混合进行缩合反应形成中间体1；而后保护基形成中间体2；将中间体2与TBTU、HOBT、碱性物质和(2R，3R)‑2‑(((保护基)羰基)氨基)‑3‑甲基戊酸混合进行缩合反应形成中间体3；再脱除保护基。该方法可以利用化学合成方法合成得到L‑异亮氨酸‑L‑苏氨酸(叔丁酯)‑L‑天冬氨酸(叔丁酯)‑叔丁酯，且得到的产物纯度高，杂质含量低，特别是异构体的含量低。