本发明涉及环境修复菌剂技术领域，是一种微生物固定化菌剂及其制备方法和应用，该微生物固定化菌剂，包括将香茅醇假单胞菌、巴基斯坦鞘氨醇杆菌、嗜麦寡养食单胞菌三种菌种混合培养得到菌悬液；将三种菌种通过吸附‑包埋固定化方式固定后得到微生物固定化菌剂。本发明采用改性生物炭结合吸附‑包埋固定化方式对三种菌种处理，可以帮助微生物抵制外界环境的毒性干扰，增强微生物活性，提高氧气和水分子的传递速率，增强微生物的生物活性及降解相关酶活性，提升微生物固定化菌剂在新环境中的竞争力，增强菌剂的吸附降解性能。