本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种基于CRISPR/Cas12a与AlphaLisa联用的DNA检测分析方法，首先将Cas12a蛋白与合成的crRNA、生物样本中的target DNA结合，形成Cas12a蛋白/crRNA/target DNA三元复合体，激发Cas12a蛋白的旁系切割能力，切割两端标记的ssDNA探针；然后使用可以特异性结合的受体微球和供体微球与反应剩余的两端标记的ssDNA探针孵育，当两种微球与未被切割的ssDNA相连时，在激光激发情况下，完成光信号的检测。本发明大大提升了所有生物样本中的DNA的准确性、灵敏度和荧光的稳定性。