本发明公开了一种抗性糊精粪菌液及其制备方法与在预防大鼠肥胖中的应用。本发明方法包括以下步骤：(1)收集：SPF级屏障收集高脂饮食和抗性糊精喂养的大鼠新鲜粪便；(2)搅拌：将大鼠粪便置于离心管，加入生理盐水，搅拌均匀(3)离心：将搅拌后的粪便溶液离心，收集上清液，即为抗性糊精粪菌液。本发明采用抗性糊精粪菌液预防高脂饮食大鼠的肥胖，通过建立模型用于抗性糊精产品生理功能评价，发现，经抗性糊精粪菌液干预后高脂饮食大鼠的体重增长和脂肪蓄积可趋于正常水平，糖耐量受损和肠道菌群结构得到改善，抗性糊精粪菌液预防肥胖效果明显，为肥胖症的治疗和微生物组功能产品的开发提供新思路。