本发明属于生物工程领域，具体涉及一种体外生物转化生产羟基酪醇的方法及其应用。本发明提供了一种包括芳香醛合酶、醛酮还原酶、酪氨酸酶的组合物用于生产羟基酪醇。本发明的羟基酪醇合成路线非常的简单易操作，酪氨酸作为起始底物价格便宜，具有很好的经济适用性。而且本发明的羟基酪醇合成路线较短、操作简便，尤其是不需要使用有毒化学试剂和易爆化学品，具有很高的环境友好性。本发明设计的方法路线只需简单的几个酶加上缓冲液即可，相比于化学合成法，杂质更少，后期分离纯化也更为方便。