本发明公开了一种可溶高活性重组III型人源胶原蛋白的制备方法，构建含有毕赤酵母的分子伴侣蛋白Hsp104、泛素样蛋白(SUMO)和hCOL3A1的基因克隆，利用Hsp104修正错误折叠蛋白的特性辅助hCOL3A1正确折叠，利用SUMO对蛋白的增溶作用增加hCOL3A1的溶解性。再将利用ULP1酶对SUMO蛋白的特异性识别和切割作用，获得完全人源的重组III型胶原蛋白。这一方法得到的重组III型人源胶原蛋白产品纯度高，具备空间结构，可溶性好，活性高，产品质量稳定，产物可以制作药物或者美容化妆用品。