本发明公开了一种L‑苏氨酸醛缩酶及其制备方法与应用。所述L‑苏氨酸醛缩酶与SEQ ID NO：1相比在以下一个或多个位置处存在氨基酸残基差异：14、18、19、91、116、119、120、247、300、316、332和333；且所述L‑苏氨酸醛缩酶的氨基酸序列与SEQ ID NO：1相比具有至少97％的序列一致性。本发明公开的L‑苏氨酸醛缩酶在制备(2S，3R)‑对甲砜基苯丝氨酸中具有底物转化率高、产物d.e.值高的特点，有着潜在的应用价值。