本实用新型公开了一种盖玻片分离机构及分离装置，盖玻片分离机构包括玻片盒、拨弹件、转轴、第一弹性件与第二弹性件，玻片盒具有用于容纳盖玻片的容纳腔以及供盖玻片进出容纳腔的口部，拨弹件转动连接于玻片盒，第一弹性件与第二弹性件沿第一方向位于转轴的两侧。本实用新型通过第一弹性件与第二弹性件同时向拨弹件施加弹性力，使拨弹件能够始终接触盖玻片，并向盖玻片提供摩擦作用以使盖玻片弯曲，拨弹件在第一弹性件与第二弹性件的共同作用下，能够跟随盖玻片的实际尺寸而实时摆动，且转动过程较为轻便，以兼容盖玻片的尺寸误差，降低盖玻片未分离的概率，进而提高玻片质量。