公开(公告)号：CN119614601A

公开(公告)日：2025-03-14

申请号：CN202411616687.1

申请日：2024-11-13

Applicant: 北京化工大学

Inventor： 张桂敏 ,  陈君豪 ,  林晓帆 ,  沈兴宇 ,  王诗卉

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/65 ,  C12N15/64 ,  C12N15/62 ,  C12N1/21 ,  C12P21/02 ,  C07K14/47 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及人源抗菌肽的重组表达载体、工程菌、构建方法和应用，涉及分子生物学技术领域。所述重组表达载体的结构为pET28a‑sfGFP‑HRV3C切点‑LL37，所述pET28a‑sfGFP‑HRV3Cp切点‑LL37中LL37的核苷酸序列如SED ID NO：1所示；所述pET28a‑sfGFP‑HRV3Cp切点‑LL37中sfGFP为超折叠绿色荧光蛋白。与现有技术相比，本发明结合融合表达策略与LL37的蛋白自身特性，设计了带有融合标签的表达系统，以促进LL37在大肠杆菌中的可溶性表达，实现了目的蛋白的高效生产；与现有的获得目的蛋白方式相比，本发明通过使用sfGFP提升了蛋白表达量，更加适用于大规模的工业应用。

公开(公告)号：CN114045276A

公开(公告)日：2022-02-15

申请号：CN202111322894.2

申请日：2021-11-09

Applicant: 北京化工大学

Inventor： 张桂敏 ,  王美星 ,  李佳维 ,  李晓迪 ,  巫攀 ,  袁其朋

IPC: C12N9/18 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N15/11 ,  C12N1/21 ,  A23L5/20 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于酶工程技术领域，公开了一种比酶活提高的中性玉米赤霉烯酮降解酶突变体。该突变体具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，或该突变体是在SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列基础上缺失、替换、插入或/和添加一个至几个氨基酸的保守性突变而获得的保守性变异体。本发明提供的中性玉米赤霉烯酮降解酶突变体的比酶活是野生型的3.3倍，可以广泛应用于真菌毒素玉米赤霉烯酮的酶降解。

公开(公告)号：CN119464263A

公开(公告)日：2025-02-18

申请号：CN202311010029.3

申请日：2023-08-11

Applicant: 北京化工大学

Inventor： 张桂敏 ,  李晓迪 ,  崔鑫

IPC: C12N9/80 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K14/415 ,  C12P21/06 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及蛋白质谷氨酰胺酶突变体、编码基因、重组载体、重组菌及制备方法和应用，涉及生物工程技术领域，所述蛋白质谷氨酰胺酶突变体具有SEQ ID NO:1所示序列发生氨基酸突变的序列，所述发生氨基酸突变的位点为63W、65I、87A、102S、136M、144P、193S、204F、211V、261F、262G、264L、271V、289M中的任一突变的位点或至少两种突变的位点的组合。本发明通过双质粒共表达系统直接产生有活性的蛋白质谷氨酰胺酶，通过定点突变构建了蛋白质谷氨酰胺酶的单点突变体和组合突变体，所提供的突变体的比酶活和热稳定性都有较大的提升，对于提升食品中蛋白质的溶解性和乳化性等方面具有重要意义，更利于满足社会生产的需要。

公开(公告)号：CN114045276B

公开(公告)日：2023-08-29

申请号：CN202111322894.2

申请日：2021-11-09

Applicant: 北京化工大学

Inventor： 张桂敏 ,  王美星 ,  李佳维 ,  李晓迪 ,  巫攀 ,  袁其朋

IPC: C12N9/18 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N15/11 ,  C12N1/21 ,  A23L5/20 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于酶工程技术领域，公开了一种比酶活提高的中性玉米赤霉烯酮降解酶突变体。该突变体具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，或该突变体是在SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列基础上缺失、替换、插入或/和添加一个至几个氨基酸的保守性突变而获得的保守性变异体。本发明提供的中性玉米赤霉烯酮降解酶突变体的比酶活是野生型的3.3倍，可以广泛应用于真菌毒素玉米赤霉烯酮的酶降解。

公开(公告)号：CN116179581A

公开(公告)日：2023-05-30

申请号：CN202210836430.1

申请日：2022-07-15

Applicant: 北京化工大学

Inventor： 张桂敏 ,  张发英 ,  王诗卉

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/65 ,  C12N15/62 ,  C12N15/56

Abstract: 本发明涉及一种用于大肠杆菌自裂解的裂解模块、系统及其应用，涉及大肠杆菌自裂解领域，所述裂解模块为SP‑lysozyme‑SsrA，所述SP为编码信号肽的核苷酸序列，所述SsrA降解标签的氨基酸序列为SEQ ID NO：8，所述lysozyme的核苷酸序列为SEQ ID NO：1，所述SP融合在lysozyme的N‑端，所述SsrA融合在lysozyme的C‑端。通过采用更简单、高效的方式协助细胞质中的溶菌酶(lysozyme)进入周质空间，降低裂解模块数量以减少对宿主细胞造成的代谢负担；同时解决了裂解模块泄漏表达的问题，降低细胞毒性，提高了宿主细胞的生物量和目的蛋白产量。

公开(公告)号：CN118497153A

公开(公告)日：2024-08-16

申请号：CN202410400313.X

申请日：2024-04-03

Applicant: 北京化工大学

Inventor： 张桂敏 ,  孙旭庭 ,  张发英 ,  王文雅

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A62D3/02 ,  C12R1/19 ,  A62D101/28

Abstract: 本发明涉及枯草芽孢杆菌漆酶突变体、编码基因、重组载体、重组菌及制备方法和应用，涉及基因工程和生物工程技术领域，枯草芽孢杆菌漆酶突变体具有SEQ ID NO:1所示序列发生突变的序列，所述发生突变的位点为D113P、T196M、A469V中的任一突变的位点或至少两种突变的位点的组合。本发明通过定点突变获得一系列突变体，并进行相对酶活和热稳定性分析，对序列SEQ ID NO:1进行改造，D113P、T196M、A469V中的任一突变的位点或至少两种突变的位点的组合，得到枯草芽孢杆菌漆酶突变体(包括单点突变体和组合突变体)，达到高比活性或/和高热稳定性，具有重要应用价值。