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公开(公告)号：CN102360008B
公开(公告)日：2013-09-25
申请号：CN201110177133.2
申请日：2011-06-28
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
IPC分类号： G01N33/535 , G01N33/569 , C07K14/03
摘要： 本发明涉及生物工程领域，特别涉及检测鸭瘟病毒抗体的试剂盒及检测方法，所述ELISA试剂盒由固相支持物、抗体捕获剂、酶标二抗、底物、封闭液组成，所述抗体捕获剂为鸭瘟病毒gG截段重组蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO：1所示;检测方法包括：固相抗原的制备、一抗结合、二抗结合、显色、检测并判定几步骤；本试剂盒特异性、敏感性及稳定性好；本检测方法操作简单。
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公开(公告)号：CN102004150B
公开(公告)日：2013-09-25
申请号：CN201010299560.3
申请日：2010-09-30
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
IPC分类号： G01N33/569 , C12N15/38 , C12N15/70 , C07K14/03
摘要： 本发明涉及动物医学领域，特别涉及用于检测鸭瘟病毒抗体的方法，具体包括固相抗原的制备、一抗结合、二抗结合、显色及检测并判定等步骤，本方法是基于纯化的重组UL51蛋白建立的间接ELISA法，其特异性好，对鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、鸭疫里默氏菌(RA)、鸭大肠杆菌(E.coli)的阳性血清进行检测，结果均为阴性；该方法的批内或批间重复试验显示变异系数均小于10％，能检出经1∶3200倍稀释的DPV疫苗免疫鸭阳性血清。
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公开(公告)号：CN102250224B
公开(公告)日：2013-06-05
申请号：CN201110177128.1
申请日：2011-06-28
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
摘要： 本发明涉及生物工程领域，特别涉及鸭瘟病毒gG截段重组蛋白及其制备方法,其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示;然后利用基因工程技术，将其核苷酸序列进行克隆的基础上，将其与原核表达载体pET-32a(+)连接，成功转化大肠杆菌BL21(DE3)表达系统进行诱导、表达的基因工程产品;该蛋白的表达形式是gGM/His融合蛋白，表达的融合蛋白分子量为50kDa，将产品设计为融合表达一是考虑便于纯化，二是能增加表达蛋白的免疫原性;经原核表达系统表达后的产品经Westernblot进行鉴定后表面具有与天然蛋白相似的免疫反应活性。
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公开(公告)号：CN101967458B
公开(公告)日：2011-12-14
申请号：CN201010502308.8
申请日：2010-10-11
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
摘要： 本发明公开了一种生产鸭疫里氏杆菌疫苗用菌液的方法，包括一级种子的繁殖与鉴定、二级种子的繁殖、发酵；所述的一级种子的繁殖与鉴定为：将冻干基础菌种接入含10％犊牛血清的营养肉汤，37℃培养24小时；然后划线接种在含10％犊牛血清营养琼脂平板上，在含5～10％CO2或者烛缸的环境中，经37℃、24～48小时培养后选典型菌落接种含10％犊牛血清营养琼脂斜面若干支，置37℃、5-10％CO2或者烛缸环境下培养24小时，作为一级种子；所述的二级种子繁殖为：取一级种子接种于含10％犊牛血清的营养肉汤，置37℃培养24小时，取样作纯粹检验合格后，置2～8℃保存，使用期不得超过5日；所述的发酵，发酵所用的培养基为：含1％裂解全血的N-J合成培养基；发酵的菌种接种量为：按培养基量的2％接种二级种子液；发酵方式为：培养罐液体发酵培养；培养条件为：37℃连续培养24小时。
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公开(公告)号：CN102183658A
公开(公告)日：2011-09-14
申请号：CN201110047062.4
申请日：2011-02-28
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
IPC分类号： G01N33/68 , G01N33/531
摘要： 本发明涉及动物医学领域，特别涉及用于检测鸭瘟病毒抗体的方法，具体包括固相抗原的制备、一抗结合、二抗结合、显色及检测并判定等步骤，本方法是基于纯化的重组UL55蛋白建立的间接ELISA法，其特异性好，对鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、鸭疫里默氏菌(RA)、鸭大肠杆菌(E.coli)、鸭源沙门氏菌(Salmonella)、鸭肿头性出血症病毒和鸭源流感病毒的阳性血清进行检测，结果均为阴性；该方法的对酶标板内或板间重复试验显示变异系数均小于10％，能检出经1∶6400倍稀释的DPV弱毒疫苗免疫鸭的阳性血清。
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公开(公告)号：CN102012432A
公开(公告)日：2011-04-13
申请号：CN201010299530.2
申请日：2010-09-30
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
IPC分类号： G01N33/68 , G01N33/569 , G01N33/532 , C12N15/38 , C12N15/70 , C07K14/03
摘要： 本发明特别涉及基于重组UL51蛋白的胶体金免疫层析试纸及其制备方法，所述胶体金免疫层析试纸中硝基纤维膜上的测试线由浓度≥2mg/mL的重组UL51蛋白包被而成，对照线由浓度≥1mg/mL的兔免疫球蛋白包被而成，金标垫由胶体金标记的≥2mg/mL重组UL51蛋白和≥2mg/mL的羊抗兔免疫球蛋白的混合液包被而成；试纸的制作方法包括硝基纤维膜上测试线和对照线的喷制、金标垫的制备及胶体金免疫层析试纸条的组装；本发明还涉及试纸在检测鸭瘟病毒抗体中的运用；本试纸用于检测鸭瘟病毒抗体的检测灵敏度和特异性高，本制备方法操作简单实用，本运用首次将抗重组UL51蛋白制备成胶体金试纸用于检测鸭瘟病毒抗体。
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公开(公告)号：CN102012428A
公开(公告)日：2011-04-13
申请号：CN201010299524.7
申请日：2010-09-30
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/558 , G01N33/543 , G01N33/531
摘要： 本发明涉及基于抗重组UL51蛋白抗体的胶体金试纸，其由吸收垫、底板、硝基纤维膜、金标垫和样品垫组成，所述硝基纤维膜上的测试线由浓度≥1mg/mLA动物抗重组UL51蛋白抗体IgG包被而成，所述金标垫由浓度≥2mg/mL胶体金标记B动物抗重组UL51蛋白抗体IgG包被而成，所述硝基纤维膜上的对照线由浓度≥1mg/mL C动物抗B动物IgG包被而成；所述胶体金试纸的制备方法包括硝基纤维膜上测试线和对照线喷制、金标垫制备及胶体金免疫层析试纸条的组装；本试纸用于检测鸭瘟病毒抗原的检测灵敏度和特异性高，本制备方法操作简单实用，本运用首次将抗重组UL51蛋白抗体制备成胶体金试纸用于检测鸭瘟病毒抗原。
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公开(公告)号：CN102004150A
公开(公告)日：2011-04-06
申请号：CN201010299560.3
申请日：2010-09-30
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
IPC分类号： G01N33/569 , C12N15/38 , C12N15/70 , C07K14/03
摘要： 本发明涉及动物医学领域，特别涉及用于检测鸭瘟病毒抗体的方法，具体包括固相抗原的制备、一抗结合、二抗结合、显色及检测并判定等步骤，本方法是基于纯化的重组UL51蛋白建立的间接ELISA法，其特异性好，对鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、鸭疫里默氏菌(RA)、鸭大肠杆菌(E.coli)的阳性血清进行检测，结果均为阴性；该方法的批内或批间重复试验显示变异系数均小于10％，能检出经1∶3200倍稀释的DPV疫苗免疫鸭阳性血清。
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公开(公告)号：CN101967458A
公开(公告)日：2011-02-09
申请号：CN201010502308.8
申请日：2010-10-11
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
摘要： 本发明公开了一种生产鸭疫里氏杆菌疫苗用菌液的方法，包括一级种子的繁殖与鉴定、二级种子的繁殖、发酵；所述的一级种子的繁殖与鉴定为：将冻干基础菌种接入含10％犊牛血清的营养肉汤，37℃培养24小时；然后划线接种在含10％犊牛血清营养琼脂平板上，在含5～10％CO2或者烛缸的环境中，经37℃、24～48小时培养后选典型菌落接种含10％犊牛血清营养琼脂斜面若干支，置37℃、5-10％CO2或者烛缸环境下培养24小时，作为一级种子；所述的二级种子繁殖为：取一级种子接种于含10％犊牛血清的营养肉汤，置37℃培养24小时，取样作纯粹检验合格后，置2～8℃保存，使用期不得超过5日；所述的发酵，发酵所用的培养基为：含1％裂解全血的N-J合成培养基；发酵的菌种接种量为：按培养基量的2％接种二级种子液；发酵方式为：培养罐液体发酵培养；培养条件为：37℃连续培养24小时。
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公开(公告)号：CN102183658B
公开(公告)日：2014-03-19
申请号：CN201110047062.4
申请日：2011-02-28
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
IPC分类号： G01N33/68 , G01N33/531
摘要： 本发明涉及动物医学领域，特别涉及用于检测鸭瘟病毒抗体的方法，具体包括固相抗原的制备、一抗结合、二抗结合、显色及检测并判定等步骤，本方法是基于纯化的重组UL55蛋白建立的间接ELISA法，其特异性好，对鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、鸭疫里默氏菌(RA)、鸭大肠杆菌(E.coli)、鸭源沙门氏菌(Salmonella)、鸭肿头性出血症病毒和鸭源流感病毒的阳性血清进行检测，结果均为阴性；该方法的对酶标板内或板间重复试验显示变异系数均小于10％，能检出经1∶6400倍稀释的DPV弱毒疫苗免疫鸭的阳性血清。
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