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公开(公告)号：CN102360008B
公开(公告)日：2013-09-25
申请号：CN201110177133.2
申请日：2011-06-28
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
IPC分类号： G01N33/535 , G01N33/569 , C07K14/03
摘要： 本发明涉及生物工程领域，特别涉及检测鸭瘟病毒抗体的试剂盒及检测方法，所述ELISA试剂盒由固相支持物、抗体捕获剂、酶标二抗、底物、封闭液组成，所述抗体捕获剂为鸭瘟病毒gG截段重组蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO：1所示;检测方法包括：固相抗原的制备、一抗结合、二抗结合、显色、检测并判定几步骤；本试剂盒特异性、敏感性及稳定性好；本检测方法操作简单。
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公开(公告)号：CN102004150B
公开(公告)日：2013-09-25
申请号：CN201010299560.3
申请日：2010-09-30
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
IPC分类号： G01N33/569 , C12N15/38 , C12N15/70 , C07K14/03
摘要： 本发明涉及动物医学领域，特别涉及用于检测鸭瘟病毒抗体的方法，具体包括固相抗原的制备、一抗结合、二抗结合、显色及检测并判定等步骤，本方法是基于纯化的重组UL51蛋白建立的间接ELISA法，其特异性好，对鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、鸭疫里默氏菌(RA)、鸭大肠杆菌(E.coli)的阳性血清进行检测，结果均为阴性；该方法的批内或批间重复试验显示变异系数均小于10％，能检出经1∶3200倍稀释的DPV疫苗免疫鸭阳性血清。
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公开(公告)号：CN102250224B
公开(公告)日：2013-06-05
申请号：CN201110177128.1
申请日：2011-06-28
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
摘要： 本发明涉及生物工程领域，特别涉及鸭瘟病毒gG截段重组蛋白及其制备方法,其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示;然后利用基因工程技术，将其核苷酸序列进行克隆的基础上，将其与原核表达载体pET-32a(+)连接，成功转化大肠杆菌BL21(DE3)表达系统进行诱导、表达的基因工程产品;该蛋白的表达形式是gGM/His融合蛋白，表达的融合蛋白分子量为50kDa，将产品设计为融合表达一是考虑便于纯化，二是能增加表达蛋白的免疫原性;经原核表达系统表达后的产品经Westernblot进行鉴定后表面具有与天然蛋白相似的免疫反应活性。
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公开(公告)号：CN101967458B
公开(公告)日：2011-12-14
申请号：CN201010502308.8
申请日：2010-10-11
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
摘要： 本发明公开了一种生产鸭疫里氏杆菌疫苗用菌液的方法，包括一级种子的繁殖与鉴定、二级种子的繁殖、发酵；所述的一级种子的繁殖与鉴定为：将冻干基础菌种接入含10％犊牛血清的营养肉汤，37℃培养24小时；然后划线接种在含10％犊牛血清营养琼脂平板上，在含5～10％CO2或者烛缸的环境中，经37℃、24～48小时培养后选典型菌落接种含10％犊牛血清营养琼脂斜面若干支，置37℃、5-10％CO2或者烛缸环境下培养24小时，作为一级种子；所述的二级种子繁殖为：取一级种子接种于含10％犊牛血清的营养肉汤，置37℃培养24小时，取样作纯粹检验合格后，置2～8℃保存，使用期不得超过5日；所述的发酵，发酵所用的培养基为：含1％裂解全血的N-J合成培养基；发酵的菌种接种量为：按培养基量的2％接种二级种子液；发酵方式为：培养罐液体发酵培养；培养条件为：37℃连续培养24小时。
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公开(公告)号：CN102183658A
公开(公告)日：2011-09-14
申请号：CN201110047062.4
申请日：2011-02-28
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
IPC分类号： G01N33/68 , G01N33/531
摘要： 本发明涉及动物医学领域，特别涉及用于检测鸭瘟病毒抗体的方法，具体包括固相抗原的制备、一抗结合、二抗结合、显色及检测并判定等步骤，本方法是基于纯化的重组UL55蛋白建立的间接ELISA法，其特异性好，对鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、鸭疫里默氏菌(RA)、鸭大肠杆菌(E.coli)、鸭源沙门氏菌(Salmonella)、鸭肿头性出血症病毒和鸭源流感病毒的阳性血清进行检测，结果均为阴性；该方法的对酶标板内或板间重复试验显示变异系数均小于10％，能检出经1∶6400倍稀释的DPV弱毒疫苗免疫鸭的阳性血清。
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公开(公告)号：CN102012432A
公开(公告)日：2011-04-13
申请号：CN201010299530.2
申请日：2010-09-30
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
IPC分类号： G01N33/68 , G01N33/569 , G01N33/532 , C12N15/38 , C12N15/70 , C07K14/03
摘要： 本发明特别涉及基于重组UL51蛋白的胶体金免疫层析试纸及其制备方法，所述胶体金免疫层析试纸中硝基纤维膜上的测试线由浓度≥2mg/mL的重组UL51蛋白包被而成，对照线由浓度≥1mg/mL的兔免疫球蛋白包被而成，金标垫由胶体金标记的≥2mg/mL重组UL51蛋白和≥2mg/mL的羊抗兔免疫球蛋白的混合液包被而成；试纸的制作方法包括硝基纤维膜上测试线和对照线的喷制、金标垫的制备及胶体金免疫层析试纸条的组装；本发明还涉及试纸在检测鸭瘟病毒抗体中的运用；本试纸用于检测鸭瘟病毒抗体的检测灵敏度和特异性高，本制备方法操作简单实用，本运用首次将抗重组UL51蛋白制备成胶体金试纸用于检测鸭瘟病毒抗体。
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公开(公告)号：CN102012428A
公开(公告)日：2011-04-13
申请号：CN201010299524.7
申请日：2010-09-30
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/558 , G01N33/543 , G01N33/531
摘要： 本发明涉及基于抗重组UL51蛋白抗体的胶体金试纸，其由吸收垫、底板、硝基纤维膜、金标垫和样品垫组成，所述硝基纤维膜上的测试线由浓度≥1mg/mLA动物抗重组UL51蛋白抗体IgG包被而成，所述金标垫由浓度≥2mg/mL胶体金标记B动物抗重组UL51蛋白抗体IgG包被而成，所述硝基纤维膜上的对照线由浓度≥1mg/mL C动物抗B动物IgG包被而成；所述胶体金试纸的制备方法包括硝基纤维膜上测试线和对照线喷制、金标垫制备及胶体金免疫层析试纸条的组装；本试纸用于检测鸭瘟病毒抗原的检测灵敏度和特异性高，本制备方法操作简单实用，本运用首次将抗重组UL51蛋白抗体制备成胶体金试纸用于检测鸭瘟病毒抗原。
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公开(公告)号：CN102004150A
公开(公告)日：2011-04-06
申请号：CN201010299560.3
申请日：2010-09-30
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
IPC分类号： G01N33/569 , C12N15/38 , C12N15/70 , C07K14/03
摘要： 本发明涉及动物医学领域，特别涉及用于检测鸭瘟病毒抗体的方法，具体包括固相抗原的制备、一抗结合、二抗结合、显色及检测并判定等步骤，本方法是基于纯化的重组UL51蛋白建立的间接ELISA法，其特异性好，对鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、鸭疫里默氏菌(RA)、鸭大肠杆菌(E.coli)的阳性血清进行检测，结果均为阴性；该方法的批内或批间重复试验显示变异系数均小于10％，能检出经1∶3200倍稀释的DPV疫苗免疫鸭阳性血清。
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公开(公告)号：CN101967458A
公开(公告)日：2011-02-09
申请号：CN201010502308.8
申请日：2010-10-11
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
摘要： 本发明公开了一种生产鸭疫里氏杆菌疫苗用菌液的方法，包括一级种子的繁殖与鉴定、二级种子的繁殖、发酵；所述的一级种子的繁殖与鉴定为：将冻干基础菌种接入含10％犊牛血清的营养肉汤，37℃培养24小时；然后划线接种在含10％犊牛血清营养琼脂平板上，在含5～10％CO2或者烛缸的环境中，经37℃、24～48小时培养后选典型菌落接种含10％犊牛血清营养琼脂斜面若干支，置37℃、5-10％CO2或者烛缸环境下培养24小时，作为一级种子；所述的二级种子繁殖为：取一级种子接种于含10％犊牛血清的营养肉汤，置37℃培养24小时，取样作纯粹检验合格后，置2～8℃保存，使用期不得超过5日；所述的发酵，发酵所用的培养基为：含1％裂解全血的N-J合成培养基；发酵的菌种接种量为：按培养基量的2％接种二级种子液；发酵方式为：培养罐液体发酵培养；培养条件为：37℃连续培养24小时。
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公开(公告)号：CN101975855B
公开(公告)日：2013-10-02
申请号：CN201010261638.2
申请日：2010-08-25
申请人： 四川农业大学实验动物工程技术中心
IPC分类号： G01N33/569
摘要： 本发明涉及动物医药领域，特别涉及鸭传染性浆膜炎灭活疫苗的效力检测试剂及方法，该检测试剂通过与鸭传染性浆膜炎灭活疫苗免疫动物的血清发生凝集反应的程度来检测鸭传染性浆膜炎灭活疫苗的效力，由菌体含量为2.00×108CFU/mL的鸭疫里默氏杆菌抗原与稀释剂混合而成，稀释剂的体积大于或等于待测血清体积的3倍，鸭疫里默氏杆菌抗原的体积等于待测血清与稀释剂的体积之和；该检测试剂配制简单，成本低廉，专一性强；利用该试剂检测鸭传染性浆膜炎灭活疫苗效力的方法包括凝集反应、观测结果、效力判断共三个步骤，避免了活体试验对动物的伤害，且操作简单，仅需通过测量血清中间数值即可判断疫苗效力。
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