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公开(公告)号：CN101591713B
公开(公告)日：2011-11-02
申请号：CN200910027228.9
申请日：2009-05-25
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明涉及一种用环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测小鹅瘟病毒的试剂盒及检测方法。本发明含有10X等温反应缓冲液、Bst DNA聚合酶8M/μL、10mM dNTP、100mM硫酸镁、10μM内引物1、10μM内引物2、10μM外引物1、10μM外引物2和4M甜菜碱的反应液A、反应液B(50mM MgCl2)和反应液C(100X的荧光染料SYBR Green I)。通过对组织样品中DNA、鹅泄殖腔棉拭子样品中DNA提取、小鹅瘟病毒的环介导等温扩增、扩增产物的显色检测，从而检测出小鹅瘟病毒。解决了现有技术时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂等缺陷。本发明具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，适于现场快速检测。
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公开(公告)号：CN101899534A
公开(公告)日：2010-12-01
申请号：CN201010173082.1
申请日：2010-05-14
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明涉及一种用二重PCR技术对感染番鸭群中小鹅瘟病毒(Goose Parvovirus，GPV)和番鸭细小病毒(Muscovy Duck Parvovirus，MDPV)进行快速鉴别诊断的试剂盒及检测方法。本发明含有Taq DNA聚合酶(5U/μL)、10×PCR buffer、Mg2+(10mmol/L)、dNTP(10mmol/L)、2对特异性引物。通过对组织样品中DNA提取、PCR，从而鉴别出感染番鸭群的病毒类型。解决了现有技术无法快速鉴别两种病毒的缺陷。本发明具有特异性强、灵敏度高、快速等特点，适于临床快速鉴别诊断。
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公开(公告)号：CN101591713A
公开(公告)日：2009-12-02
申请号：CN200910027228.9
申请日：2009-05-25
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明涉及一种用环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测小鹅瘟病毒的试剂盒及检测方法。本发明含有10X等温反应缓冲液、Bst DNA聚合酶8M/μL、10mM dNTP、100mM硫酸镁、10μM内引物1、10μM内引物2、10μM外引物1、10μM外引物2和4M甜菜碱的反应液A、反应液B(50mM MgCl2)和反应液C(100X的荧光染料SYBR Green I)。通过对组织样品中DNA、鹅泄殖腔棉拭子样品中DNA提取、小鹅瘟病毒的环介导等温扩增、扩增产物的显色检测，从而检测出小鹅瘟病毒。解决了现有技术时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂等缺陷。本发明具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，适于现场快速检测。
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公开(公告)号：CN1231598C
公开(公告)日：2005-12-14
申请号：CN03131899.1
申请日：2003-06-13
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C12Q1/68 , C12N15/861 , C12N7/01
摘要： 本发明属于生物技术制药工业中的基因工程生产疫苗药物的技术领域。以中国分离的I群禽腺病毒为材料，通过PCR方法将该病毒基因组的两个末端L片段和r片段、ITR片段扩增出来，克隆进pHC粘粒载体中，并以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因为报告基因，插入设计好的r片段和ITR片段之间，构建转移质粒载体pFAV-eGFP，然后转染已被野生病毒感染了的鸡胚肾细胞，进行同源重组，筛选重组病毒，获得表达增强型绿色荧光蛋白的重组禽腺病毒。从而确定位于基因组右末端r片段和ITR片段之间的位点为病毒复制非必需区，并以此为载体开发研制相关基因工程产品。
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公开(公告)号：CN1181887C
公开(公告)日：2004-12-29
申请号：CN02138397.9
申请日：2002-10-08
申请人： 扬州大学
IPC分类号： A61K38/21 , C12N15/81 , C07K14/555 , A61P15/14
摘要： 本发明属于生物技术制药工业中的基因工程生产多肽药物的技术领域。应用一步法逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对奶牛γ-干扰素(BovIFN-γ)基因的cDNA序列进行扩增，从奶牛脾淋巴细胞的总RNA中扩增出特异性片段。将BovIFN-γ基因克隆到大肠杆菌表达载体PGEX-6P-1谷光甘肽-S-转移酶的下游，经IPTG诱导后，表达融合蛋白；或将BovIFN-γ基因克隆到酵母高效表达载体，通过转化酵母细胞，获得阳性克隆，并大量表达基因产物；通过亲和层析纯化，大量制备表达产物，通过细胞病变抑制试验证实，表达产物有极好的抑制VSV病毒的活性。或将BovIFN-γ基因插入到pcDNA3，通过大量制备质粒DNA，以质粒DNA直接注射奶牛乳腔，使其BovIFN-γ基因在乳腺中大量表达，从而达到预防或治疗奶牛隐性乳房炎的目的。
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公开(公告)号：CN1462804A
公开(公告)日：2003-12-24
申请号：CN03131899.1
申请日：2003-06-13
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C12Q1/68 , C12P19/34 , C12N7/01 , C12N15/861 , A61K48/00 , A61K39/235 , A61P31/12
摘要： 本发明属于生物技术制药工业中的基因工程生产疫苗药物的技术领域。以中国分离的I群禽腺病毒为材料，通过PCR方法将该病毒基因组的两个末端L片段和r片段、ITR片段扩增出来，克隆进pHC粘粒载体中，并以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因为报告基因，插入设计好的r片段和ITR片段之间，构建转移质粒载体pFAV－eGFP，然后转染已被野生病毒感染了的鸡胚肾细胞，进行同源重组，筛选重组病毒，获得表达增强型绿色荧光蛋白的重组禽腺病毒。从而确定位于基因组右末端r片段和ITR片段之间的位点为病毒复制非必需区，并以此为载体开发研制相关基因工程产品。
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公开(公告)号：CN101899534B
公开(公告)日：2012-07-04
申请号：CN201010173082.1
申请日：2010-05-14
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明涉及一种用二重PCR技术对感染番鸭群中小鹅瘟病毒(Goose Parvovirus，GPV)和番鸭细小病毒(Muscovy Duck Parvovirus，MDPV)进行快速鉴别诊断的试剂盒及检测方法。本发明含有Taq DNA聚合酶(5U/μL)、10×PCR buffer、Mg2+(10mmol/L)、dNTP(10mmol/L)、2对特异性引物。通过对组织样品中DNA提取、PCR，从而鉴别出感染番鸭群的病毒类型。解决了现有技术无法快速鉴别两种病毒的缺陷。本发明具有特异性强、灵敏度高、快速等特点，适于临床快速鉴别诊断。
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公开(公告)号：CN1513996A
公开(公告)日：2004-07-21
申请号：CN03131926.2
申请日：2003-06-16
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C12N15/38 , C12N7/01 , C12N15/62 , C12Q1/68 , A61K39/255
摘要： 本发明属于生物技术制药工业中的基因工程生产药物的技术领域，用PCR法从CVI988/Rispens弱毒疫苗株感染的鸭胚或鸡胚成纤维细胞(DEF)基因组DNA扩增UL49h基因片段，获得大小为732bp的PCR产物。将PCR产物克隆并测序分析，与经典MDV强毒GA株比较，确定弱毒株CVI988的UL49h存在3个定点突变(第172、244和733位bp)和一个缺失性突变，缺失的氨基酸为200TTKSER205，该位点亲水性强，用Jarmeson－Wolf法分析，该位点位于VP22主要的抗原决定簇区。利用CVI988 VP22基因或部分基因序列开发传导人或动物病原体主要保护性抗原、传导人或动物治疗性药物、提高目的蛋白的免疫保护效果和增强药物的疗效。
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公开(公告)号：CN1657616A
公开(公告)日：2005-08-24
申请号：CN200510038289.7
申请日：2005-01-25
申请人： 扬州大学
摘要： 高抗病毒活性重组鸡γ－干扰素的制取方法及用途，涉及一种广谱高效抗病毒基因工程产品的制取方法。将ChIFN－γ基因从真核质粒中经双酶切后克隆到转移载体中，获得重组转移质粒pFASTBAC1－ChIFN－γ；取DH10Bac感受态细胞，加入1ng pFASTBAC1－ChIFN－γ，转座后，用SOC培养基稀释培养物，涂布Luria平板，培养后，挑取白色菌落，Luria平板进行纯化，阳性质粒命名为Bacmid－ChIFN－γ，提取阳性质粒DNA；取上述重组DNA质粒转染Sf9细胞，制得高抗病毒活性重组鸡γ－干扰素。本发明还在于将该干扰素用于抑制MDV GA对CEF的致病变作用、抑制NDV F48E8在细胞上的增殖、抗AIV(H5N1)病毒对细胞的致病作用。
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公开(公告)号：CN1437023A
公开(公告)日：2003-08-20
申请号：CN03113002.X
申请日：2003-03-20
申请人： 扬州大学
IPC分类号： G01N33/53 , G01N33/535 , G01N33/573 , G01N33/569
摘要： 本发明属于禽病毒检测诊断技术领域。J亚群禽白血病病毒(ALV－J)是90年代鉴定出的一个新的禽白血病病毒亚群，是肉鸡髓细胞瘤(ML)的病原。本发明用PCR方法扩增出ALV－J囊膜蛋白env基因，并进行克隆，然后用昆虫杆状病毒表达系统表达ALV－J env基因产物，以此重组基因产物作为免疫源免疫BALB/C小鼠，研制出特异性单克隆抗体。再以单克隆抗体研制出了独特酶联免疫试验检测试剂盒，以其检测感染鸡血清、脏器及羽囊中抗原抗体复合物，判定是否感染ALV－J。
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