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公开(公告)号：CN118006690A
公开(公告)日：2024-05-10
申请号：CN202410035165.6
申请日：2024-01-10
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C12N15/866 , A61K39/295 , A61K39/215 , A61P31/14 , C12N15/62 , C07K19/00 , G01N33/569
摘要： 本发明属于基因工程和疫苗开发技术领域，公开了三种猪致病性冠状病毒主要保护性蛋白串联表达载体的构建及应用，选取PEDV、PDCoV、TGEV的中和抗原表位基因，按一定顺序与pFastBacHTA昆虫表达载体连接，通过对不同位点的酶切及测序验证是否串联成功；而后通过重组杆状病毒真核表达系统对串联基因进行融合蛋白表达，以间接免疫荧光、Western Blot验证融合蛋白表达效果；将表达融合蛋白的重组病毒免疫小鼠并通过间接免疫荧光验证其免疫原性；并以串联重组病毒感染Sf9细胞后获得的病变细胞的破碎上清作为包被抗原，建立了针对三种冠状病毒主要保护性蛋白的ELISA检测方法。本发明为预防致猪腹泻的三种冠状病毒提供了一种行之有效的方法，为冠状病毒新型疫苗的开发提供了新思路。
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公开(公告)号：CN1916637A
公开(公告)日：2007-02-21
申请号：CN200610127111.4
申请日：2006-09-07
申请人： 扬州大学
IPC分类号： G01N33/577 , G01N33/547 , G01N33/52
摘要： 单克隆抗体介导的呋喃它酮残留检测方法及其应用，属于药物残留检测领域。本发明以抗呋喃它酮单克隆抗体为介导建立呋喃它酮残留ELISA快速检测方法，可用于制作检测试剂盒和检测试纸条，可方便地对呋喃它酮残留量进行ELISA快速。该方法相对于液质联用色谱仪分析法，对样品的前处理要求较低，分析过程很简单，检测时间较短，而且检测灵敏度也较高，使用成本低。
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公开(公告)号：CN1916636A
公开(公告)日：2007-02-21
申请号：CN200610127110.X
申请日：2006-09-07
申请人： 扬州大学
IPC分类号： G01N33/577 , G01N33/547 , G01N33/52
摘要： 单克隆抗体介导的呋喃咀啶残留检测方法及其应用，属于药物残留检测领域。本发明以抗呋喃咀啶单克隆抗体为介导建立呋喃咀啶残留ELISA快速检测方法，可用于制作检测试剂盒和检测试纸条，可方便地对呋喃咀啶残留量进行ELISA快速。该方法相对于液质联用色谱仪分析法，对样品的前处理要求较低，分析过程很简单，检测时间较短，而且检测灵敏度也较高，使用成本低。
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公开(公告)号：CN112760320B
公开(公告)日：2023-11-28
申请号：CN202011394290.4
申请日：2020-12-02
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12N5/10 , A61K31/713 , A61P31/14
摘要： 本发明属于基因工程和生物制品研究领域，具体涉及有效抑制猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制的外源性人工miRNA，所述外源性人工miRNA是下述1)或2)的双链核苷酸：1)正义链和反义链的序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；2)正义链和反义链的序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。与针对PEDV蛋白编码基因的siRNA相比，本发明筛选的针对病毒N基因保守序列的人工miRNA能抑制PEDV复制，不仅可作为抗PEDV的新型生物制剂进行开发，而且可用于抗病猪品系培育。
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公开(公告)号：CN110456051B
公开(公告)日：2022-06-03
申请号：CN201910788083.8
申请日：2019-08-26
申请人： 扬州大学
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/543 , G01N27/327 , G01N27/02 , C01G39/06 , C01B32/184 , B82Y30/00 , B82Y15/00 , B22F9/24 , B22F1/054
摘要： 本发明涉及猪流行性腹泻病毒无标记的阻抗型免疫传感器及其制备方法。所述猪流行性腹泻病毒无标记的阻抗型免疫传感器，是将猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体PEDV‑2C11固定于纳米金/二硫化钼/还原石墨烯复合纳米材料修饰的电极表面而构建制得。本发明通过合成纳米金/二硫化钼/还原石墨烯(AuNPs/MoS2/rGO)复合材料来制备免疫传感器，该传感器制备过程更加简便，同时通过事先将纳米金与二硫化钼/还原石墨烯构建复合材料，可维持纳米金在复合材料中的含量保持稳定，同时由于复合纳米材料中可能增加了吸附的的纳米金从而有效地增大了抗体在电极表面的固定量，可提高免疫传感器检测的灵敏度。
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公开(公告)号：CN110456051A
公开(公告)日：2019-11-15
申请号：CN201910788083.8
申请日：2019-08-26
申请人： 扬州大学
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/543 , G01N27/327 , G01N27/02 , C01G39/06 , C01B32/184 , B82Y30/00 , B82Y15/00 , B22F9/24 , B22F1/00
摘要： 本发明涉及猪流行性腹泻病毒无标记的阻抗型免疫传感器及其制备方法。所述猪流行性腹泻病毒无标记的阻抗型免疫传感器，是将猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体PEDV-2C11固定于纳米金/二硫化钼/还原石墨烯复合纳米材料修饰的电极表面而构建制得。本发明通过合成纳米金/二硫化钼/还原石墨烯(AuNPs/MoS2/rGO)复合材料来制备免疫传感器，该传感器制备过程更加简便，同时通过事先将纳米金与二硫化钼/还原石墨烯构建复合材料，可维持纳米金在复合材料中的含量保持稳定，同时由于复合纳米材料中可能增加了吸附的的纳米金从而有效地增大了抗体在电极表面的固定量，可提高免疫传感器检测的灵敏度。
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公开(公告)号：CN101591713B
公开(公告)日：2011-11-02
申请号：CN200910027228.9
申请日：2009-05-25
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明涉及一种用环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测小鹅瘟病毒的试剂盒及检测方法。本发明含有10X等温反应缓冲液、Bst DNA聚合酶8M/μL、10mM dNTP、100mM硫酸镁、10μM内引物1、10μM内引物2、10μM外引物1、10μM外引物2和4M甜菜碱的反应液A、反应液B(50mM MgCl2)和反应液C(100X的荧光染料SYBR Green I)。通过对组织样品中DNA、鹅泄殖腔棉拭子样品中DNA提取、小鹅瘟病毒的环介导等温扩增、扩增产物的显色检测，从而检测出小鹅瘟病毒。解决了现有技术时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂等缺陷。本发明具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，适于现场快速检测。
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公开(公告)号：CN101591713A
公开(公告)日：2009-12-02
申请号：CN200910027228.9
申请日：2009-05-25
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明涉及一种用环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测小鹅瘟病毒的试剂盒及检测方法。本发明含有10X等温反应缓冲液、Bst DNA聚合酶8M/μL、10mM dNTP、100mM硫酸镁、10μM内引物1、10μM内引物2、10μM外引物1、10μM外引物2和4M甜菜碱的反应液A、反应液B(50mM MgCl2)和反应液C(100X的荧光染料SYBR Green I)。通过对组织样品中DNA、鹅泄殖腔棉拭子样品中DNA提取、小鹅瘟病毒的环介导等温扩增、扩增产物的显色检测，从而检测出小鹅瘟病毒。解决了现有技术时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂等缺陷。本发明具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，适于现场快速检测。
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公开(公告)号：CN111217916A
公开(公告)日：2020-06-02
申请号：CN202010039900.2
申请日：2020-01-15
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/866 , C12N7/01 , A61K39/295 , A61K39/215 , A61K39/225 , A61K39/15 , A61P31/14
摘要： 本发明涉及猪三种致腹泻病毒中和抗原表位融合蛋白重构体及其制备方法和应用。所述猪三种致腹泻病毒PEDV、TGEV、PoRV的中和抗原表位融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。编码该中和抗原表位融合蛋白的基因序列如SEQ ID NO.1所示。本发明分别选取PEDV、TGEV、PoRV的主要中和抗原表位基因并进行拼接，而后通过重组杆状病毒真核表达系统对串联基因进行融合蛋白表达。将表达串联基因融合蛋白的重组病毒通过腹腔注射的方式免疫小鼠，可诱导机体产生免疫应答，具有较强的免疫原性。本发明为预防PEDV、TGEV、PoRV感染提供了一种新的方法，也为猪腹泻病毒新型疫苗的开发奠定了基础。
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公开(公告)号：CN101957375B
公开(公告)日：2013-03-20
申请号：CN201010295008.7
申请日：2010-10-15
申请人： 扬州大学
IPC分类号： G01N33/558 , G01N27/02 , G01N27/30
摘要： 本发明涉及呋喃它酮残留物无标记的阻抗型免疫传感器，及其制备方法和应用，所说的该传感器通过金胶制备、金电极的预处理、1，4-苯二硫醇修饰金电极、单层纳米金胶的自组装和抗体的固定5个步骤而制得。其特征在于是将纳米金通过自组装方法固定于金电极表面，用来固定呋喃它酮残留物的单克隆抗体而构建得到。使用时，先建立阻抗的相对变化率%△Rct与AMOZ浓度的关系，再根据待测样品的阻抗相对变化率%△Rct就可确定其AMOZ浓度。采用本发明的传感器和检测方法具有快速简便的特点，解决当前呋喃它酮残留检测操作费时的缺陷。
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