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公开(公告)号：CN116694589B
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202310663759.7
申请日：2023-06-06
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种7β‑羟基类固醇脱氢酶的突变体及其应用。所述的7β‑HSDH突变体在SEQ ID NO.1所示的野生型上进行单点突变、两两复合突变和三点复合突变，经筛选获得复合突变体T189V/V207M，在此基础上进一步筛选出25个氨基酸残基位点，通过定点饱和突变，提高7β‑HSDH的催化效率以及热稳定性的突变体T189V/V207M/V91P、T189V/V207M/M144H、T189V/V207M/G146A、T189V/V207M/A158S、T189V/V207M/V183I。本发明构建的突变后的7β‑HSDH突变体相较于出发7β‑HSDH酶活力提高了3.8倍，突变后的7β‑HSDH突变体在催化100g·L‑1的7‑酮基‑石胆酸转化率可达到91％，具有工业化生产前景。
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公开(公告)号：CN114686414B
公开(公告)日：2024-02-27
申请号：CN202210258249.7
申请日：2022-03-16
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种精准定量调控大肠杆菌全细胞催化的方法及应用，属于基因工程与生物催化领域。本发明通过构建色氨酸操纵子及温敏阻遏系统，可实现大肠杆菌生长前期稳定、正常生长，稳定期促进目的蛋白的表达；该系统还通过控制发酵温度，调节结构基因的表达水平，调控D,D‑羧肽酶实时表达量，增加了胞内可溶性肽聚糖，提高了重组大肠杆菌外膜的透性，有助于催化反应的底物及产物自由穿梭于细胞内外，更加有效的促进全细胞的高效催化。
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公开(公告)号：CN114457133B
公开(公告)日：2024-02-27
申请号：CN202210216549.9
申请日：2022-03-07
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种以N‑乙酰葡萄糖胺发酵液为底物全细胞催化生产N‑乙酰神经氨酸的方法，属于生物工程应用领域。本发明在以N‑乙酰葡萄糖胺发酵液为底物的转化体系中进行全细胞催化生产N‑乙酰神经氨酸，通过对全细胞转化条件进行优化，在温度为30℃、转化液初始pH为6.5、底物丙酮酸浓度为1.38mol/L、TritonX‑100添加量为0.4％、菌体OD600为30、在5L发酵罐等条件下进行全细胞转化，可得到N‑乙酰神经氨酸180mmol/L，摩尔转化率达65.45％。
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公开(公告)号：CN114150029B
公开(公告)日：2023-09-01
申请号：CN202111437282.8
申请日：2021-11-29
申请人： 江南大学
摘要： 本发明属于生物材料技术领域，具体涉及一种虎奶菇超支化多糖降解物及其制备方法。本发明是针对超支化多糖的糖苷键构成，采用纤维素酶或β‑葡萄糖苷酶处理的方法，有效切断其中的糖苷键，获得了多糖降解产物，酶解后，得到的多糖降解产物分子量显著降低。酶法降解具有特异性强、反应条件温和、过程可控、绿色高效等优点，且降解时不破坏底物的基团结构，是实现超支化多糖有效降解的重要工具。针对虎奶菇超支化多糖的结构特点，本发明采用对其中大量存在的糖苷键具有降解作用的纤维素酶或β‑葡萄糖苷酶，通过控制酶解条件，生成低分子量的多糖降解产物和还原糖，为超支化多糖的结构改性和高附加值产品的开发奠定基础。
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公开(公告)号：CN116445435A
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202310064553.2
申请日：2023-01-17
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N9/04 , C07K19/00 , C12N15/53 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P33/00 , C12P33/02 , C12P33/06 , C12R1/19
摘要： 本发明公开了一种融合表达催化生产熊去氧胆酸的方法及应用，属于酶工程和生物催化技术领域。本发明通过linker连接7β‑羟基类固醇脱氢酶和7α‑羟基类固醇脱氢酶两个基因，构建融合蛋白7α‑HSDH‑Linker‑7β‑HSDH，并将构建的融合蛋白用于熊去氧胆酸的催化生产工艺，为酶法催化生产熊去氧胆酸的工艺提供了一种新的选择方向，同时对其催化生产熊去氧胆酸的工艺进行了系统优化，显著提高了熊去氧胆酸的转化效率。
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公开(公告)号：CN111826389B
公开(公告)日：2022-05-13
申请号：CN202010455589.X
申请日：2020-05-26
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N15/70 , C12N15/57 , C12N1/21 , C12N9/04 , C12N9/08 , C12N9/10 , C12N9/16 , C12N9/26 , C12N9/48 , C07K14/78 , C07K14/435 , C12P21/02 , C12R1/19
摘要： 本发明涉及一种提高大肠杆菌重组蛋白胞外分泌水平的方法，通过同源重组的方法将包含1‑4个SD序列的基因片段整合至编码D‑丙氨酰‑D‑丙氨酸羧肽酶DacA的启动子与DacA编码基因之间。本发明通过整合不同的SD序列至大肠杆菌DacA基因的启动子与DacA编码基因之间，提高了D,D‑羧肽酶DacA的表达，从而提高大肠杆菌重组蛋白胞外分泌水平。
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公开(公告)号：CN114410631A
公开(公告)日：2022-04-29
申请号：CN202210091687.9
申请日：2022-01-26
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N15/61 , C12N15/81 , C12N1/19 , C12P7/02 , C12R1/74
摘要： 本发明公开了一种高效合成西柏三烯一醇菌株的构建方法及其应用，属于代谢工程领域。所述构建方法为将西柏三烯一醇合成途径中从乙酰辅酶A到甲羟戊酸合成相关基因在酵母细胞质中表达，从IPP和DMAPP到西柏三烯一醇合成相关基因在酵母过氧化物酶体中过表达，从甲羟戊酸到IPP和DMAPP合成相关基因在细胞质或过氧化物酶体中过表达。利用该方法构建的工程菌株西柏三烯一醇产量显著提高。本发明构建的基因工程菌株经过9天发酵后西柏三烯一醇产量可达1391.3mg·L‑1。本发明构建的工程菌株可以高效合成西柏三烯一醇，并且生产性能稳定，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN112409464B
公开(公告)日：2022-04-22
申请号：CN202011322536.7
申请日：2020-11-23
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌重组蛋白胞外生产水平的信号肽突变体及应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对信号肽M1(MSDEQKKPE QIHRRDILKWGAMAGAAVA)的N端区域进行定向进化，筛选获得具有高效胞外分泌水平的信号肽突变体文库，通过该突变体文库构建获得系列重组蛋白胞外分泌水平显著提高的重组枯草芽孢杆菌菌株。将获得的正向信号肽突变体进行排列组合复合突变，获得具有高效重组蛋白表达分泌水平的信号肽复合突变体，利用其构建获得具有高效胞外蛋白胞外分泌水平的枯草杆菌杆菌突变株。本发明所筛选获得的信号肽突变体，对于重组蛋白在枯草芽孢杆菌中具有高效的胞外蛋白分泌水平，重组蛋白胞外分泌水平提高了15倍以上。本发明方法对信号肽改造及重组蛋白在宿主中的高效分泌与生产具有重要指导意义。
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公开(公告)号：CN114277040A
公开(公告)日：2022-04-05
申请号：CN202111597793.6
申请日：2021-12-24
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种高效合成β‑胡萝卜素菌株的构建方法及其应用，属于代谢工程领域。所述构建方法为将β‑胡萝卜素合成途径中从乙酰辅酶A到甲羟戊酸合成相关基因在酵母细胞质中表达，从IPP和DMAPP到β‑胡萝卜素合成相关基因在酵母过氧化物酶体中过表达，从甲羟戊酸到IPP和DMAPP合成相关基因在细胞质或过氧化物酶体中过表达。利用该方法构建的工程菌株β‑胡萝卜素产量显著提高。本发明构建的基因工程菌株经过9天发酵后发酵液中菌体干重可达213g/L，β‑胡萝卜素产量可达6.5g·L‑1。本发明构建的工程菌株可以高效合成β‑胡萝卜素，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN113897325A
公开(公告)日：2022-01-07
申请号：CN202111307645.6
申请日：2021-11-05
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及一种重组大肠杆菌，以大肠杆菌CCTCC NO：M2019390为宿主细胞，表达来源于拟南芥的糖基转移酶基因UGT85A1，获得一株红景天苷的高产菌株E.coli YMGRS。本发明的重组大肠杆菌实现了从头合成红景天苷，底物为葡萄糖，价格低廉，且该菌株在装有2.5L M9Y培养基的5L发酵罐发酵后，红景天苷最高产量为9.3g/L，单位菌体浓度的产量为0.31g/(L·OD600)，生产强度高。
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