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公开(公告)号：CN102621305B
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201210042330.8
申请日：2012-02-21
申请人： 四川农业大学
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/531
摘要： 本发明公开了一种猪巨细胞病毒抗体间接阻断ELISA检测试剂盒。试剂盒内设有抗体检测板，酶结合物工作液，阻断抗体，样品稀释液，洗涤液，显色液A，显色液B，终止液。该试剂盒的检测板为猪巨细胞病毒gB优势抗原表位区蛋白重组抗原包被的可拆卸96孔酶标板，酶结合物工作液为辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔抗体，阻断抗体为兔抗猪巨细胞病毒gB优势抗原表位区蛋白多克隆抗体。本发明有益的积极效果是：特异性强、灵敏度高、操作简单，适合于临床大规模推广应用，具有广阔的市场前景。
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公开(公告)号：CN102952898A
公开(公告)日：2013-03-06
申请号：CN201210398440.8
申请日：2012-10-10
申请人： 四川农业大学
摘要： 本发明公开了一种猪环曲病毒RT-PCR检测试剂盒及其检测方法，试剂盒组成包括：阳性对照模板：对猪环曲病毒的阳性样品抽提RNA，逆转录后获得的cDNA，共20ul，每次1ul；阴性对照样品：SPF猪粪便样品和PBS按SPF猪粪便样品的重量∶PBS的体积＝0.5～1.0∶1加入PBS混匀，3000r/min离心15min，取上清液抽提RNA，逆转录后获得的cDNA，共20ul，每次用1ul；上游引物P1和下游引物P2浓度均为10pmol/ul，各30ul，每个样品各用0.5ul；2×Taq PCR Master Mix：300ul，每个样品用10ul；ddH2O：200ul，每个样品用8ul。本发明与现有技术相比有以下优点：灵敏度较高，最低可以检测10pg病毒核酸；检测时间短，可用于大批样品的检测。
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公开(公告)号：CN102590503A
公开(公告)日：2012-07-18
申请号：CN201210018567.2
申请日：2012-01-20
申请人： 四川农业大学
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/543 , G01N33/531
摘要： 本发明公开了一种猪细环病毒抗体间接阻断ELISA检测试剂盒。包括抗体检测板，酶结合物工作液，样品稀释液，显色液A，显色液B，终止液；阻断抗体，洗涤缓冲液；所述的阻断抗体为使用纯化后的TTV2-ORF1基因抗原表位区蛋白免疫家兔后，从家兔体内获得的多克隆抗体。本发明有益的积极效果是：特异性强、操作简单，适合于临床大规模推广应用，具有良好的市场前景。
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公开(公告)号：CN118006603B
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202410036555.5
申请日：2024-01-10
申请人： 四川农业大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas13a检测猪流行性腹泻病毒的试剂盒及其应用，属于分子生物学诊断技术领域。本发明的引物(SEQ ID NO.3和4)和CrRNA(SEQ ID NO.13)特异性强、敏感性好，含有上述引物和CrRNA的试剂盒操作简单、检测快速、结果可视化，使得本发明建立的基于RT‑RAA和CRISPR‑Cas13a技术的检测PEDV的方法可以用于PEDV的现场可视化检测，从而为提高生猪养殖行业检测PEDV水平，降低养殖场生物安全风险提供技术手段。
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公开(公告)号：CN118581277A
公开(公告)日：2024-09-03
申请号：CN202410785519.9
申请日：2024-06-18
申请人： 四川农业大学 , 成都市畜禽遗传资源保护中心 , 生猪技术创新中心(重庆)
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas13d技术检测猪圆环病毒2型的方法，属于分子生物学诊断技术领域。该方法能够成功检测出临床阳性PCV2样本，并且通过结合使用RNA荧光报告分子，可以实现对PCV2的现场可视化检测，检测过程仅需使用蓝光透射仪进行照射，通过观察反应体系中扩增产物是否呈现荧光，即可判定检测结果。此外，该试剂盒也支持使用qPCR仪器进行定量检测，从而在1小时内快速判定结果。本发明不仅减少了诊断成本和时间，并且结果可视化，对于提高生猪养殖业中PCV2水平的检测能力、降低养殖场的生物安全风险将具有重要意义。
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公开(公告)号：CN115948473B
公开(公告)日：2024-03-08
申请号：CN202211565866.8
申请日：2022-12-07
申请人： 四川农业大学
IPC分类号： C12N15/869 , C12N15/41 , C12N15/66 , A61K39/125 , A61P31/14
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公开(公告)号：CN115948473A
公开(公告)日：2023-04-11
申请号：CN202211565866.8
申请日：2022-12-07
申请人： 四川农业大学
IPC分类号： C12N15/869 , C12N15/41 , C12N15/66 , A61K39/125 , A61P31/14
摘要： 本发明公开了一种表达外源SVA衣壳蛋白伪狂犬病毒载体及其构建方法与应用，属于生物技术领域。该构建方法包括以下步骤：(1)将SEQ ID NO.1序列插入到含有伪狂犬gI和28K基因序列同源臂的pEGFP‑gI28k真核表达质粒中，获得pEGFP‑gI28k‑VP4‑1载体；(2)将pEGFP‑gI28k‑VP4‑1和psgRNA‑gE质粒转染BHK‑21细胞，再接种已缺失TK基因的伪狂犬病毒载体PRVXJ；(3)待接种后的细胞病变80％，反复冻融细胞，离心取上清，上清液中含有PRV真核表达载体，简称为rPRVXJ‑ΔgE/gI/TK‑VP4‑2‑3‑1；(4)载体纯化。
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公开(公告)号：CN111733289B
公开(公告)日：2022-04-05
申请号：CN202010686380.4
申请日：2020-07-16
申请人： 四川农业大学
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种用于检测APPV、CSFV、PCV3和PTV1的引物组、探针及方法，检测APPV的引物组包含：具有如SEQ.ID NO1、2所示核苷酸序列的上、下游引物；检测CSFV的引物组包含：具有如SEQ.ID NO4、5所示核苷酸序列的上、下游引物；检测PCV3的引物组包含：具有如SEQ.ID NO7、8所示核苷酸序列的上、下游引物；检测PTV1的引物组包含：具有如SEQ.ID NO10、11所示核苷酸序列的上、下游引物。本发明的方法能够同时对APPV、CSFV、PCV3和PTV1四种病毒进行检测，而且具有良好的特异性、灵敏性、重复性和稳定性。
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公开(公告)号：CN112481188A
公开(公告)日：2021-03-12
申请号：CN202011377974.3
申请日：2020-11-30
申请人： 四川农业大学
摘要： 本发明公开了一种高效产β‑葡萄糖醛酸酶混合菌剂的制备方法，包括步骤一，新鲜动物胆囊样本采集；步骤二，大肠杆菌分离；步骤三，大肠杆菌鉴定；步骤四，大肠杆菌胆汁存活筛选；步骤五，胆酸多浓度梯度定向诱导培育；步骤六，牛胆囊仿生动态模拟培育；步骤七，大肠杆菌β‑G活性测定；步骤八，菌液混合培养；步骤九，动物毒性试验检测；该发明通过胆汁和胆酸的驯化定向得到在胆汁中存活时间长、繁殖活力高的大肠杆菌菌株；通过牛胆囊仿生动态模拟得到适应胆囊环境变化的大肠杆菌菌株；通过PCR技术、菌液混合、酶活力测定得到β‑G活力高的大肠杆菌菌株；通过毒素、毒性结合筛选，得到对动物生长影响最小的大肠杆菌菌株。
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公开(公告)号：CN111690778A
公开(公告)日：2020-09-22
申请号：CN202010686391.2
申请日：2020-07-16
申请人： 四川农业大学
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种APPV病毒的PCR引物、探针及其鉴别方法，鉴别APPV病毒的微滴数字PCR反应体系为：ddPCRTM Supermix for Probes(no dUTP)、具有如SEQ.ID NO1所示核苷酸序列的上游引物、具有如SEQ.ID NO2所示核苷酸序列的下游引物、具有如SEQ.ID NO3所示核苷酸序列的探针、待检测样品的cDNA和水。本发明的微滴式数字PCR方法能够快速检测，具有良好的特异性，其能检出的最低检测限为0.15copies/μL，灵敏度高，而且组内组间重复试验变异系数均小于6％，具有良好的重复性和稳定性。
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