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公开(公告)号：CN112521466A
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011580792.6
申请日：2020-01-22
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明公开了一种提高异源蛋白分泌量的信号肽突变体及其用途，属于基因工程技术领域。本发明中的信号肽突变体是将来源于革兰氏阳性菌Sec途径的信号肽N区的带电荷氨基酸进行定点突变，使N区氨基酸的电荷密度为0.2～0.8之间；对所述信号肽H区进行突变，使H区的氨基酸疏水性在0～70之间；对所述信号肽C区的氨基酸进行定点突变，使C区最后三位氨基酸突变为丙氨酸‑任意氨基酸‑丙氨酸。本发明可以有效提高异源蛋白在微生物宿主中的分泌量，有效推动了目的蛋白的高效表达及工业化生产。
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公开(公告)号：CN111153968A
公开(公告)日：2020-05-15
申请号：CN202010074806.0
申请日：2020-01-22
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明公开了一种提高外源碱性蛋白酶表达量的信号肽突变体及其构建方法与用途，属于基因工程技术领域。所述突变体是将来源于芽孢杆菌的Sec途径的信号肽的C端第-1位和/或第-3位氨基酸突变为丙氨酸,即将C端的最后三位氨基酸序列突变为AXA或者在信号肽C端后增加氨基酸序列AXA，所述X为任意氨基酸。本发明构建方法简单易行，适用于枯草芽孢杆菌系统，信号肽突变后的碱性蛋白酶表达量均高于未突变体。本发明为介导枯草芽孢杆菌表达系统中异源碱性蛋白酶基因的表达奠定基础，有效推动了碱性蛋白酶的高效表达及工业化生产。
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公开(公告)号：CN109321552A
公开(公告)日：2019-02-12
申请号：CN201811182852.1
申请日：2018-10-11
申请人： 山东隆科特酶制剂有限公司 , 天津科技大学
摘要： 本发明属于酶的基因工程技术领域，涉及一种新型普鲁兰酶及其基因和氨基酸序列以及制备的方法，其技术方案是经菌种筛选获得一株能够产生普鲁兰酶的长野解普鲁兰杆菌，通过易错PCR技术对所筛选得到普鲁兰酶基因进行改造，从而得到一段改造后的普鲁兰酶的基因，然后将该新型普鲁兰酶基因，分别在枯草芽胞杆菌表达系统、解淀粉芽孢杆菌表达系统和地衣芽孢杆菌表达系统中进行表达，实现该新型普鲁兰酶的不同制备方法。同时该新型普鲁兰酶在食品工业、医药工业方面有较好的作用。
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公开(公告)号：CN112521466B
公开(公告)日：2022-06-17
申请号：CN202011580792.6
申请日：2020-01-22
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明公开了一种提高异源蛋白分泌量的信号肽突变体及其用途，属于基因工程技术领域。本发明中的信号肽突变体是将来源于革兰氏阳性菌Sec途径的信号肽N区的带电荷氨基酸进行定点突变，使N区氨基酸的电荷密度为0.2～0.8之间；对所述信号肽H区进行突变，使H区的氨基酸疏水性在0～70之间；对所述信号肽C区的氨基酸进行定点突变，使C区最后三位氨基酸突变为丙氨酸‑任意氨基酸‑丙氨酸。本发明可以有效提高异源蛋白在微生物宿主中的分泌量，有效推动了目的蛋白的高效表达及工业化生产。
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公开(公告)号：CN114480352A
公开(公告)日：2022-05-13
申请号：CN202210097345.8
申请日：2022-01-26
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明主要通过DNA改组技术，利用DNaseI消化地衣芽胞杆菌来源和克劳氏芽胞杆菌来源的碱性蛋白酶基因，纯化回收目的片段，通过无引物PCR和有引物PCR构建碱性蛋白酶突变库，筛选获得了一种碱性蛋白酶活力显著提高的突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。适宜条件下，突变体碱性蛋白酶活力为61.75U/mL，相比野生型有显著提高。
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公开(公告)号：CN111087476B
公开(公告)日：2021-08-17
申请号：CN201911407764.1
申请日：2019-12-31
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明公开了一种提高外源蛋白表达量的双信号肽及其构建方法与用途，属于基因工程技术领域。所述双信号肽来源于芽孢杆菌Sec途径中不同的信号肽的组合。本发明通过从枯草芽孢杆菌信号肽库中，构建双信号肽组合与目的蛋白即蔗糖异构酶、果聚糖蔗糖酶或角蛋白酶基因相结合的表达载体，实现了外源基因的高表达，特别是为枯草芽孢杆菌表达外源基因提供了有效的表达元件及其组合方法。
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公开(公告)号：CN110106128B
公开(公告)日：2021-08-17
申请号：CN201910332240.4
申请日：2019-04-24
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明提供了一种生产重组碱性蛋白酶的基因工程菌，是利用核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的启动子与信号肽组合与克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶基因aprE构建重组表达载体，并转入枯草芽孢杆菌宿主WB600中，最终电转到解淀粉芽孢杆菌CGMCC No.11218中，获得重组基因工程菌。利用该基因工程菌发酵生产的重组碱性蛋白酶的摇瓶发酵活力达到18000U/mL，是原始启动子P43和信号肽SPSacB组合的2.52倍，在5L罐放大实验，该重组菌株酶活达到58000U/mL，为实现碱性蛋白酶的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN111205354B
公开(公告)日：2021-01-22
申请号：CN202010074786.7
申请日：2020-01-22
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明公开了一种提高异源蛋白分泌量的信号肽突变体及其构建方法与用途，属于基因工程技术领域。本发明中的信号肽突变体是将来源于革兰氏阳性菌Sec途径的信号肽N区的带电荷氨基酸进行定点突变，使N区氨基酸的电荷密度为0.2～0.8之间；对所述信号肽H区进行突变，使H区的氨基酸疏水性在0～70之间；对所述信号肽C区的氨基酸进行定点突变，使C区最后三位氨基酸突变为丙氨酸‑任意氨基酸‑丙氨酸。本发明可以有效提高异源蛋白在微生物宿主中的分泌量，有效推动了目的蛋白的高效表达及工业化生产。
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公开(公告)号：CN109321552B
公开(公告)日：2021-01-22
申请号：CN201811182852.1
申请日：2018-10-11
申请人： 山东隆科特酶制剂有限公司 , 天津科技大学
摘要： 本发明属于酶的基因工程技术领域，涉及一种新型普鲁兰酶及其基因和氨基酸序列以及制备的方法，其技术方案是经菌种筛选获得一株能够产生普鲁兰酶的长野解普鲁兰杆菌，通过易错PCR技术对所筛选得到普鲁兰酶基因进行改造，从而得到一段改造后的普鲁兰酶的基因，然后将该新型普鲁兰酶基因，分别在枯草芽胞杆菌表达系统、解淀粉芽孢杆菌表达系统和地衣芽孢杆菌表达系统中进行表达，实现该新型普鲁兰酶的不同制备方法。同时该新型普鲁兰酶在食品工业、医药工业方面有较好的作用。
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公开(公告)号：CN111087476A
公开(公告)日：2020-05-01
申请号：CN201911407764.1
申请日：2019-12-31
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明公开了一种提高外源蛋白表达量的双信号肽及其构建方法与用途，属于基因工程技术领域。所述双信号肽来源于芽孢杆菌Sec途径中不同的信号肽的组合。本发明通过从枯草芽孢杆菌信号肽库中，构建双信号肽组合与目的蛋白即蔗糖异构酶、果聚糖蔗糖酶或角蛋白酶基因相结合的表达载体，实现了外源基因的高表达，特别是为枯草芽孢杆菌表达外源基因提供了有效的表达元件及其组合方法。
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