重组D-3-羟基丁酸脱氢酶及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN117587049A

    公开(公告)日:2024-02-23

    申请号:CN202210980017.2

    申请日:2022-08-16

    摘要: 本申请公开了一种重组D‑3‑羟基丁酸脱氢酶及其制备方法和应用。本申请中提供了经同义密码子偏好性优化的编码D‑3‑羟基丁酸脱氢酶的多核苷酸序列,该序列在大肠杆菌中表达效率高;还提供了适配上述多核苷酸序列的载体,通过载体和多核苷酸序列的协同配合,制备获得高活性D‑3‑羟基丁酸脱氢酶,比活力高达362.87U/mg;此外还提供了制备重组D‑3‑羟基丁酸脱氢酶的方法,该方法不仅提高了D‑3‑羟基丁酸脱氢酶的产量,而且所得产物可溶性蛋白含量极高,易于纯化,简化了后处理步骤,节约了生产成本。

    在大肠杆菌中制备丙酮酸氧化酶的方法

    公开(公告)号:CN116676281A

    公开(公告)日:2023-09-01

    申请号:CN202210168414.X

    申请日:2022-02-23

    IPC分类号: C12N9/02 C12N15/70

    摘要: 本申请实施例属于丙酮酸氧化酶制备领域,涉及一种在大肠杆菌中制备丙酮酸氧化酶的方法,包括获取绿色气球菌丙酮酸氧化酶的蛋白序列SEQ ID NO:2,通过大肠杆菌同义密码子优化所述绿色气球菌丙酮酸氧化酶的蛋白序列,构建绿色气球菌丙酮酸氧化酶重组质粒;将所述绿色气球菌丙酮酸氧化酶重组质粒转化至大肠杆菌;挑取所述大肠杆菌中单克隆进行扩大培养和诱导表达,获得表达绿色气球菌丙酮酸氧化酶的菌液;对所述绿色气球菌丙酮酸氧化酶的菌液进行纯化操作,获得绿色气球菌丙酮酸氧化酶。本申请表达的丙酮酸氧化酶有产量高、生产周期短、活性高,能够工业化生产等优点。

    重组吡喃糖氧化酶及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN116426545A

    公开(公告)日:2023-07-14

    申请号:CN202111650630.X

    申请日:2021-12-30

    摘要: 本申请公开了一种重组吡喃糖氧化酶及其制备方法和应用。本申请中,编码吡喃糖氧化酶的分离的多核苷酸经密码子优化,且所述多核苷酸选自以下任一种:(i)具有如SEQ ID NO.1所示序列的多核苷酸;(ii)具有与如SEQ ID NO.1所示序列的同源性大于95%的多核苷酸;和(iii)具有与(i)或(ii)中所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸。本发明通过密码子优化核酸序列,使得其适应大肠杆菌表达系统,生产周期短、产量高且产物活性高,本发明还通过可溶性标签的配合,使得产物可溶性好,易于分离纯化。

    Taq酶突变体、其制备方法和应用
    15.
    发明公开

    公开(公告)号:CN116200363A

    公开(公告)日:2023-06-02

    申请号:CN202111445100.1

    申请日:2021-11-30

    摘要: 本申请公开了一种Taq酶突变体、其制备方法和应用。本申请中,所述Taq酶突变体包括:与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少70%同一性的氨基酸序列;所述氨基酸序列在选自下组的一个或多个位点发生突变:D335、G499、E634、F769或其组合。本申请提供的Taq酶突变体具有高扩增活性,在同等PCR循环次数下,相比野生型Taq酶可以得到更多的扩增产物、同时耐全血和高盐且不损失5’~3’外切酶活性。

    门冬氨酸氨基转移酶及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN116926091A

    公开(公告)日:2023-10-24

    申请号:CN202210335041.0

    申请日:2022-03-31

    摘要: 本申请公开了一种门冬氨酸氨基转移酶及其制备方法和应用。本申请中,提供一种编码门冬氨酸氨基转移酶的多核苷酸,所述多核苷酸经密码子优化,且所述多核苷酸选自以下任一种:(i)具有如SEQ ID NO.1所示序列的多核苷酸;(ii)具有与如SEQ ID NO.1所示序列的同源性大于95%的多核苷酸;和(iii)具有与(i)或(ii)中所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸。本申请提供的多核苷酸经过密码子优化,在大肠杆菌体系中在实现野猪门冬氨酸氨基转移酶大量可溶性表达,产物稳定性好、催化活性高,为后续其作为质控品以及试剂盒用酶提供了便捷的生产方法。