一种基于自然转化的拟态弧菌高效遗传重组方法及应用

    公开(公告)号:CN107058393B

    公开(公告)日:2021-01-08

    申请号:CN201710470525.5

    申请日:2017-06-20

    IPC分类号: C12N15/90 C12N1/21 C12R1/63

    摘要: 本发明公开了一种基于自然转化的拟态弧菌高效遗传重组方法及应用,该方法以拟态弧菌SCCF01株基因组为模板,使用目的基因上臂和目的基因下臂引物对扩增目的基因上臂序列和下臂序列;并扩增卡那霉素抗性基因片段;将扩增得到的卡那霉素抗性基因片段、目的基因上臂序列和下臂序列片段进行融合,得到含有卡那霉素抗性基因片段、目的基因上臂序列和下臂序列片段的融合PCR产物;将获得融合PCR产物与受体拟态弧菌SCCF01株进行自然转化,经过对抗性标记基因的筛选,获得拟态弧菌SCCF01株的缺失株。本发明操作过程相较于自杀质粒介导的基因重组技术和λ‑RED重组技术,无需电转质粒或打靶DNA,操作简单。

    一种鱼用白细胞介素佐剂的制备方法和用途

    公开(公告)号:CN105148267B

    公开(公告)日:2018-08-24

    申请号:CN201510425425.1

    申请日:2015-07-20

    IPC分类号: A61K39/39 A61P31/04

    摘要: 本发明公开了SEQ ID NO:3所示蛋白质或SEQ ID NO:4所示蛋白质在制备鱼用疫苗的佐剂中的用途。本发明还公开了一种复合佐剂,它含有SEQ ID NO:3所示蛋白质和SEQ ID NO:4所示蛋白质,以及药学上可接受的载体。本发明重组IL‑1β1和IL‑1β2可以有效提高鱼用疫苗的免疫原性,显著提高特异性抗体,可以作为鱼用疫苗的佐剂使用,二者联合使用时的效果明显优于同等剂量下二者单独使用(p

    一种鱼类组织病理切片脱钙液

    公开(公告)号:CN108414308A

    公开(公告)日:2018-08-17

    申请号:CN201810098707.9

    申请日:2018-01-31

    IPC分类号: G01N1/28 G01N1/30

    摘要: 本发明公开了一种鱼类组织病理切片脱钙液,包括以下组分:甲醛4~5v/v%,甲醇50~60v/v%,甲酸10~15v/v%,盐酸15~20v/v%,组织透明剂5~6v/v%,氯化钠1~2wt%,余量为蒸馏水;其中,组织透明剂包括二甲基亚砜、果糖、碳酸氢钠和十二烷基磺酸钠。组织透明剂中二甲基亚砜的体积百分比为50%~55%,果糖的质量百分比为15%~20%,碳酸氢钠的质量百分比为1%~2%,十二烷基磺酸钠的质量百分比为10%~15%,余量为水。采用本发明的脱钙液,可有效解决现有脱钙液脱钙时间慢以及透明性差的技术问题。

    一种兔病毒性出血症病毒RT-LAMP检测方法

    公开(公告)号:CN104046701A

    公开(公告)日:2014-09-17

    申请号:CN201410267882.8

    申请日:2014-06-12

    IPC分类号: C12Q1/70 C12Q1/68

    摘要: 本发明公开了一种兔病毒性出血症病毒RT-LAMP检测方法,根据RT-PCR法扩增测序的基因序列,运用在线LAMP引物设计软件Primer Explorer V4 software针对目的序列的6个不同位点,设计了4条特异性引物和1条环引物,通过反应条件优化、敏感性试验和特异性试验,初步建立了RHDV的RT-LAMP检测法,并进行临床检样初步应用。试验结果显示:该法可以扩增出183bp以上的一个梯状条带产物,可以检测到25copies的目的基因,对兔大肠杆菌、兔巴氏杆菌和实验室构建的欧洲野兔综合症病毒蛋白VP60基因重组质粒pGM-T-EBHSV的扩增均为阴性,有着比RT-PCR法更高的敏感性,在临床检测中该法阳性检出率与RT-PCR法检测结果相符合。

    一种不用于诊断目的的兔病毒性出血症病毒RT-LAMP检测方法

    公开(公告)号:CN104046701B

    公开(公告)日:2016-10-05

    申请号:CN201410267882.8

    申请日:2014-06-12

    IPC分类号: C12Q1/70 C12Q1/68

    摘要: 本发明公开了一种不用于诊断目的的兔病毒性出血症病毒RT‑LAMP检测方法,根据RT‑PCR法扩增测序的基因序列,运用在线LAMP引物设计软件Primer Explorer V4software针对目的序列的6个不同位点,设计了4条特异性引物和1条环引物,通过反应条件优化、敏感性试验和特异性试验,初步建立了RHDV的RT‑LAMP检测法,并进行临床检样初步应用。试验结果显示:该法可以扩增出183bp以上的一个梯状条带产物,可以检测到25copies的目的基因,对兔大肠杆菌、兔巴氏杆菌和实验室构建的欧洲野兔综合症病毒蛋白VP60基因重组质粒pGM‑T‑EBHSV的扩增均为阴性,有着比RT‑PCR法更高的敏感性,在临床检测中该法阳性检出率与RT‑PCR法检测结果相符合。