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公开(公告)号：CN107699608A
公开(公告)日：2018-02-16
申请号：CN201711170830.9
申请日：2017-11-22
申请人： 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司
IPC分类号： C12Q1/6841
CPC分类号： C12Q1/6841 , C12Q2565/518 , C12Q2563/107
摘要： 本发明公开一种利用染色体原位荧光杂交检验CHO外源基因插入位点的方法，包括步骤：1)探针制备：通过切口平移的方法处理构建有插入基因片段的载体，获得带有荧光基团的DNA探针；2)染色体铺展：将CHO细胞加入秋水仙胺后进行固定及涂片；3)探针杂交：将步骤1)中制备的DNA探针和步骤2)经过处理的样品涂片进行杂交；4)显微镜观察荧光的分布。本发明结合了细胞学和染色体组学，通过荧光蛋白标记的探针，可以在荧光显微镜下直观地看到插入位点分布在哪一(几)条染色体的什么位置，从而对细胞株的单克隆性进行判断。通过FISH技术可以在一个星期内完成对细胞系单克隆性的检测，并且通量也比插入序列分析有了大幅提高。
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公开(公告)号：CN105368957A
公开(公告)日：2016-03-02
申请号：CN201510927246.8
申请日：2015-12-14
申请人： 无锡药明康德生物技术股份有限公司 , 上海药明生物技术有限公司 , 天津药明康德新药开发有限公司
CPC分类号： C12Q1/6851 , C12Q2545/113 , C12Q2537/143 , C12Q2563/159 , C12Q2521/301
摘要： 本发明公开了一种CHO细胞基因拷贝数的微滴数字PCR定量检测方法，步骤包括：1)提取CHO细胞基因组DNA；2)用限制性内切酶对基因组DNA进行酶切处理；3)进行微滴数字PCR反应；4)PCR反应结束后，测定PCR反应板每孔样品的阳性微滴、阴性微滴数目，获得CHO细胞的基因拷贝数。本发明还公开了用于上述方法的引物和探针。本发明通过选择合适的参照基因、设计合适的引物和荧光标记探针、优化CHO细胞基因组模板上样量、选择合适的限制性内切酶对基因组模板进行酶切处理、评估不同的基因组提取试剂盒对ddPCR检测结果的影响，提高了CHO细胞基因拷贝数的微滴数字PCR绝对定量检测的灵敏度和精确度。
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公开(公告)号：CN108034632A
公开(公告)日：2018-05-15
申请号：CN201711281781.6
申请日：2017-12-07
申请人： 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司
IPC分类号： C12N5/071
CPC分类号： C12N5/0602 , C12N2509/10
摘要： 本发明公开一种利用流式细胞仪进行细胞单克隆化的方法，包括：步骤一、细胞分选：使用清洁后的流式细胞仪进行细胞分选，利用FSC和SSC的信号进行细胞粘连体去除，孔板中每孔分选1个目标细胞。步骤三、细胞培养：将分选后的目标细胞在二氧化碳培养箱静置培养，培养条件为36.5℃和5～6％CO2，培养5～15天，待克隆恢复。采用本发明的方法，单克隆率达到99.5％。
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公开(公告)号：CN106399360A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201510447211.4
申请日：2015-07-27
申请人： 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司
IPC分类号： C12N15/85
摘要： 本发明公开了一种基于CRISPR技术敲除FUT8基因的方法，步骤包括：1)设计sgRNA序列；2)将sgRNA序列重组至第一载体中，得第二载体；3)将第二载体转染至细胞中，抽提DNA；4)PCR扩增；5)PCR产物变性、退火，形成异源杂交双链；6)切割异源杂交双链并分析产物，得各细胞群发生NHEJ的比例；7)挑选NHEJ比例高的细胞群进行有限稀释法克隆，筛选单克隆细胞扩大培养，获得FUT8基因敲除抗体。本发明还公开了用于上述方法的sgRNA序列。本发明通过编码能识别FUT8基因特定序列的sgRNA，将其与编码核酸内切酶的序列转染进细胞中，实现了让FUT8基因失活的目的，提高了抗体ADCC活性。
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公开(公告)号：CN105738322A
公开(公告)日：2016-07-06
申请号：CN201610070333.0
申请日：2016-02-01
申请人： 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司
IPC分类号： G01N21/47
CPC分类号： G01N21/47
摘要： 本发明公开了一种亲和层析填料动态载量测定方法，步骤包括：1)用流穿液配制不同浓度纯化蛋白样品；2)制备装填填料的过滤板；3)样品加到过滤板上并孵育；4)抽滤，收集流穿液并检测蛋白浓度，拟合吸附等温线；5)装填层析柱，上样，洗脱，记录紫外出峰的保留体积和电导出峰保留体积，短接层析柱，记录电导出峰保留体积，计算填料外排水孔隙率、全透过孔隙率及填料孔隙率；6)测定蛋白水合分子平均半径；7)计算动态载量。本发明结合亲和填料和单克隆抗体的性质特点，利用高通量筛选技术研究吸附等温线和吸附动力学模型，由单克隆抗体的静态载量预测亲和层析填料的动态载量，不仅耗时短，成本低，而且测定结果的准确性高。
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公开(公告)号：CN105012949A
公开(公告)日：2015-11-04
申请号：CN201410173934.5
申请日：2014-04-28
申请人： 上海药明康德新药开发有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司
IPC分类号： A61K39/395 , A61K9/08 , A61P31/00 , A61P37/06
摘要： 本发明公开了一种重组人抗人TNFα单克隆抗体的制剂，其组成包括：重组人抗人TNFα单克隆抗体、赋形剂、渗透压调节剂、保护剂和缓冲盐；其中，在所述制剂中，重组人抗人TNFα单克隆抗体的蛋白含量为1～150mg/mL；赋形剂在所述制剂中的含量为0～20％；渗透压调节剂在所述制剂中的含量为1～20g/L；保护剂在所述制剂中的含量为0.1～10g/L；缓冲盐在所述制剂中的浓度为5～200mmol/L；所述制剂的pH为4～8。该制剂具有高蛋白浓度、制备简单、稳定性好等优点。
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公开(公告)号：CN104977291A
公开(公告)日：2015-10-14
申请号：CN201410114960.0
申请日：2014-03-26
申请人： 上海药明康德新药开发有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司 , 百奇生物科技(苏州)有限公司
IPC分类号： G01N21/76
摘要： 本发明公开了一种利用电化学发光法检测治疗性抗体类药物的细胞结合活性的方法，包括：1）将细胞铺于96孔板中，孵育；2）加入封闭液，孵育，进行封闭；3）缓冲液清洗后，加入治疗性抗体类药物，孵育；4）缓冲液清洗后，加入钌标记的抗人IgG，孵育；5）缓冲液清洗后，加入无表面活性剂的MSD read缓冲液；6）用MSD Sector Imager6000读96孔板，得到细胞结合活性结果。本发明大大提高了实验的精确度与灵敏度，大大缩短了时间，解决流式细胞仪检测细胞表面高表达受体所存在的仪器缺陷。
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公开(公告)号：CN104974979A
公开(公告)日：2015-10-14
申请号：CN201410134445.9
申请日：2014-04-02
申请人： 上海药明康德新药开发有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司
IPC分类号： C12N5/073
摘要： 本发明公开了一种调控糖基化修饰的方法，包括：以下的方法I或方法II；（1）方法I调整表达抗体的细胞株的基础培养基和补料培养基的配比，进行表达抗体的细胞株的培养，从而调控抗体的糖基化修饰；（2）方法II通过流加补料培养基，进行表达抗体的细胞株的培养，从而调控抗体的糖基化修饰。本发明能有效地调控糖基化修饰类型，相对于国际上通过对细胞株的基因改造来调控糖基化修饰的方法，本发明能够广泛的适用于抗体仿制药和抗体新药的开发和产业化。
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公开(公告)号：CN105017418A
公开(公告)日：2015-11-04
申请号：CN201410120032.5
申请日：2014-03-27
申请人： 上海药明康德新药开发有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司
摘要： 本发明公开了一种单克隆抗体纯化工艺方法，步骤包括：1）亲和层析；2）调节亲和层析洗脱液的pH值至3.3～3.8，进行病毒灭活；3）调节pH值至中性，进行深层过滤；4）阴离子交换层析；5）阳离子交换层析。本发明通过在亲和层析中加入低pH高盐的洗涤步骤，去除宿主蛋白和DNA，同时在低pH病毒灭活后采用深层过滤进行澄清处理，提高了亲和层析对抗体单体和高聚物的分离效果，从而提高了单克隆抗体产品的纯度。
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公开(公告)号：CN113924355B
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202080040147.7
申请日：2020-05-27
申请人： 上海药明生物技术有限公司
摘要： 本发明涉及一种用于监测和自动控制灌流细胞培养的拉曼光谱集成灌流细胞培养系统，包括：生物反应器，包括：(1)用于接收细胞培养物的罐体，(2)用于将营养物质从进料储器供给所述罐体的端口，(3)用于从所述罐体自动出料的端口，和(4)借助细胞滞留系统从罐体连续收集物料的端口；拉曼光谱分析仪，包括：(i)一个或多个拉曼探头，所述探头被浸入生物反应器中并被配置为在生物反应器中收集拉曼光谱，以及(ii)主机，所述主机被配置为接收由拉曼探头采集和传输的拉曼光谱并将其转换为数值；和与所述拉曼光谱分析仪、进料储器和自动出料装置通信的控制器，该控制器接收来自拉曼光谱分析仪的值并将这些值与预设参数进行比较，基于该比较的结果，该控制器进一步被配置为控制进料储器以对营养物质进入生物反应器的进料速率进行调节，并被配置为控制自动出料装置从生物反应器中自动排放物料。本发明还涉及使用该系统监测和自动控制灌流细胞培养的方法。
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