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公开(公告)号：CN107904257A
公开(公告)日：2018-04-13
申请号：CN201711247666.7
申请日：2017-11-22
申请人： 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司
CPC分类号： C12N15/85 , C12N9/0006 , C12N9/12 , C12N2800/107 , C12Y207/11002
摘要： 本发明公开一种增加CHO细胞群蛋白表达量的方法，其利用shRNA技术控制乳酸代谢通路上关键酶的转录，具体步骤包括：1)构建含有待表达蛋白序列的质粒和含有表达乳酸代谢通路上关键酶的shRNA的质粒；2)将步骤1)中构建的质粒通过转染的方法引入CHO细胞中；3)对步骤2)中转染后细胞进行抗生素筛选；4)待细胞状态恢复后，采用步骤3)筛选后的细胞生产目标蛋白；所述表达乳酸代谢通路上关键酶包括乳酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶激酶。本发明所提供的方法与传统CHO细胞群生产中需要对pH进行密切监测并不断通过加入碱来调节相比，此发明仅仅在转染时同时额外共同转染数个shRNA质粒，不但操作复杂程度大幅降低，而且对乳酸降低进而最终蛋白产量提高有较大的保障。
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公开(公告)号：CN107746424A
公开(公告)日：2018-03-02
申请号：CN201711032283.8
申请日：2017-10-30
申请人： 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司 , 苏州药明康德检测检验有限责任公司
IPC分类号： C07K1/10
CPC分类号： C07K1/10
摘要： 本发明公开一种IgG4抗体的生物偶联方法，包括：步骤1、还原：还原IgG4，使gG4抗体中的4对链间双硫键全部打开；步骤2、部分氧化：将IgG4抗体中被全部打开的4对链间双硫键部分氧化，得到的gG4抗体的游离巯基达到目标的平均偶联数4±1；步骤3、偶联反应：利用lgG4抗体的游离巯基与连接子-偶联物复合物进行生物偶联；步骤4、生物偶联产物的纯化：步骤3得到的生物偶联产物经过除去多余的偶联化合物，即得到终产物。本发明的方法制得的偶联产物混合物具有更好的产物分布，连接数为0的偶联产物含量小于5％，连接数为8的偶联产物含量小于15％，得到的偶联产物混合物经过常规纯化后可直接应用于动物或者临床试验。
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公开(公告)号：CN106755096A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201611183175.6
申请日：2016-12-20
申请人： 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司
CPC分类号： C12N15/85 , C12N15/65 , C12N2800/107 , C12N2800/90
摘要： 本发明公开一种利用piggyBac转座子在CHO细胞中获得表达目标蛋白的稳定细胞群的方法，步骤包括：1)构建含有待表达的编码目标蛋白基因和抗生素筛选基因的基因片段的质粒，和含有piggyBac转座子序列的质粒；2)将步骤1)中构建的质粒转染同时引入CHO细胞中；3)对步骤2)中转染后细胞直接在摇瓶中进行抗生素筛选。本方法能够在一到两周时间内构建稳定的细胞群，并能够高效的表达目标蛋白。以及，本发明还公开一种利用piggyBac转座子在CHO细胞中获得表达目标蛋白的稳定细胞群并直接放大生产目标蛋白的方法，可满足50升以上的生产。
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公开(公告)号：CN106139127A
公开(公告)日：2016-11-23
申请号：CN201610641421.1
申请日：2016-08-05
申请人： 无锡药明康德生物技术股份有限公司 , 上海药明生物技术有限公司
摘要： 本发明公开了一种重组凝血因子Ⅷ冻干制剂，该冻干制剂用水复溶后，包含有：重组凝血因子Ⅷ、缓冲液、纯度稳定剂、活性稳定剂、增溶剂、表面活性剂。本发明的重组凝血因子Ⅷ冻干制剂，不含白蛋白，在水中复溶迅速，且复溶后稳定性高。
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公开(公告)号：CN107699608A
公开(公告)日：2018-02-16
申请号：CN201711170830.9
申请日：2017-11-22
申请人： 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司
IPC分类号： C12Q1/6841
CPC分类号： C12Q1/6841 , C12Q2565/518 , C12Q2563/107
摘要： 本发明公开一种利用染色体原位荧光杂交检验CHO外源基因插入位点的方法，包括步骤：1)探针制备：通过切口平移的方法处理构建有插入基因片段的载体，获得带有荧光基团的DNA探针；2)染色体铺展：将CHO细胞加入秋水仙胺后进行固定及涂片；3)探针杂交：将步骤1)中制备的DNA探针和步骤2)经过处理的样品涂片进行杂交；4)显微镜观察荧光的分布。本发明结合了细胞学和染色体组学，通过荧光蛋白标记的探针，可以在荧光显微镜下直观地看到插入位点分布在哪一(几)条染色体的什么位置，从而对细胞株的单克隆性进行判断。通过FISH技术可以在一个星期内完成对细胞系单克隆性的检测，并且通量也比插入序列分析有了大幅提高。
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公开(公告)号：CN107793469A
公开(公告)日：2018-03-13
申请号：CN201710958525.X
申请日：2017-10-16
申请人： 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司 , 苏州药明康德检测检验有限责任公司
摘要： 本发明提供一种新的有效降低宿主细胞蛋白(HCP)含量的亲和纯化工艺，其具体步骤包括：步骤1、处理亲和填料，上样；步骤2、淋洗，使用pH值较低的缓冲液(3.9～5.6)，以及使用含有氯化钠、氯化钙和/或精氨酸盐酸作为添加剂的淋洗缓冲液2淋洗层析柱；步骤3、洗脱，使用不同pH洗脱缓冲液洗脱产品并收集产品。本发明所使用的材料去除HCP效果显著，适用范围广，可广泛适用于抗体类蛋白质亲和纯化工艺中，从而为有效控制抗体类药物中HCP的含量提供技术支持。
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公开(公告)号：CN104764787B
公开(公告)日：2018-03-06
申请号：CN201310624166.6
申请日：2013-11-28
申请人： 无锡药明康德生物技术股份有限公司 , 上海药明生物技术有限公司 , 苏州药明康德检测检验有限责任公司
IPC分类号： G01N27/447
摘要： 本发明公开了一种快速测定蛋白混合物中的各组分含量的毛细管等电聚焦方法，包括：1）将两性载体、添加剂、等电点标记物与待分析的蛋白混合物样品进行混合，形成混合液；2）将混合液上样于毛细管柱，聚焦并检测，得到等电聚焦谱图；3）将步骤2）的等电聚焦谱图与待分析的蛋白混合物样品中的单蛋白组分等电聚焦谱图进行比对，确定步骤2）的等电聚焦谱图中不同等电点范围对应的单蛋白组分；4）根据步骤3）的比对结果和步骤2）的等电聚焦谱图信息，确定待分析的蛋白混合物样品中的各组分含量。本发明具有通用性强、分析周期短、数据处理简单等优点，而且适用于蛋白混合物的生产工艺开发和质量控制。
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公开(公告)号：CN107064092A
公开(公告)日：2017-08-18
申请号：CN201710316873.7
申请日：2017-05-08
申请人： 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司 , 苏州药明康德检测检验有限责任公司
摘要： 本发明公开一种双特异性抗体生物学活性与滴度检测方法，该方法同时检测双特异性抗体的两个抗原结合位点，根据荧光的比值与标准品的浓度进行四参数拟合，得到标准曲线，根据标准曲线计算待测样品的浓度。该方法能够更有效地筛选出完整的抗体分子和高双特异性结合活性，高表达的细胞株；具有低反应体积的特点，能最大化节约了实验试剂成本；可大范围地推广应用在CLD克隆的高通量筛选。
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公开(公告)号：CN105368957A
公开(公告)日：2016-03-02
申请号：CN201510927246.8
申请日：2015-12-14
申请人： 无锡药明康德生物技术股份有限公司 , 上海药明生物技术有限公司 , 天津药明康德新药开发有限公司
CPC分类号： C12Q1/6851 , C12Q2545/113 , C12Q2537/143 , C12Q2563/159 , C12Q2521/301
摘要： 本发明公开了一种CHO细胞基因拷贝数的微滴数字PCR定量检测方法，步骤包括：1)提取CHO细胞基因组DNA；2)用限制性内切酶对基因组DNA进行酶切处理；3)进行微滴数字PCR反应；4)PCR反应结束后，测定PCR反应板每孔样品的阳性微滴、阴性微滴数目，获得CHO细胞的基因拷贝数。本发明还公开了用于上述方法的引物和探针。本发明通过选择合适的参照基因、设计合适的引物和荧光标记探针、优化CHO细胞基因组模板上样量、选择合适的限制性内切酶对基因组模板进行酶切处理、评估不同的基因组提取试剂盒对ddPCR检测结果的影响，提高了CHO细胞基因拷贝数的微滴数字PCR绝对定量检测的灵敏度和精确度。
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公开(公告)号：CN108034632A
公开(公告)日：2018-05-15
申请号：CN201711281781.6
申请日：2017-12-07
申请人： 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司
IPC分类号： C12N5/071
CPC分类号： C12N5/0602 , C12N2509/10
摘要： 本发明公开一种利用流式细胞仪进行细胞单克隆化的方法，包括：步骤一、细胞分选：使用清洁后的流式细胞仪进行细胞分选，利用FSC和SSC的信号进行细胞粘连体去除，孔板中每孔分选1个目标细胞。步骤三、细胞培养：将分选后的目标细胞在二氧化碳培养箱静置培养，培养条件为36.5℃和5～6％CO2，培养5～15天，待克隆恢复。采用本发明的方法，单克隆率达到99.5％。
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