公开(公告)号：CN102888391B

公开(公告)日：2015-01-21

申请号：CN201210423324.7

申请日：2012-10-30

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 李锂 ,  白佳珂 ,  马小来 ,  史绍鹏

IPC分类号： C12N11/10

摘要： 本发明涉及一种肝素酶Ⅱ的固定化方法，尤其涉及一种以壳聚糖微球为固定化材料，对肝素酶Ⅱ进行固定化的方法。肝素酶Ⅱ固定化以后具有可回收、可重复利用、酶与底物和产物易分离等优越性。

公开(公告)号：CN102888390B

公开(公告)日：2014-09-03

申请号：CN201210423099.7

申请日：2012-10-30

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 马小来 ,  白佳珂 ,  史绍鹏 ,  李锂

IPC分类号： C12N11/10

摘要： 本发明涉及一种肝素酶Ⅲ的固定化方法，尤其涉及一种以壳聚糖微球为固定化材料，对肝素酶Ⅲ进行固定化的方法。肝素酶Ⅲ固定化以后具有可回收、可重复利用、酶与底物和产物易分离等优越性。

公开(公告)号：CN103288981A

公开(公告)日：2013-09-11

申请号：CN201310245113.3

申请日：2013-06-20

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 金磊 ,  张攀 ,  黄洪 ,  马小来 ,  李锂

IPC分类号： C08B37/10 ,  A61K31/727 ,  A61P35/00

摘要： 本发明公开了一种以硫酸乙酰肝素为原料，通过硫酸酯化方法制备的硫酸乙酰肝素衍生物。硫酸乙酰肝素用无水二甲基甲酰胺溶胀，加入三氧化硫·三甲胺复合物，加热酯化，反应物的沉淀组分经蒸馏水溶解、透析、冻干，再用氯化钠溶液溶解，经乙醇沉淀、离心、去上清、干燥后制得硫酸酯化的硫酸乙酰肝素。该硫酸乙酰肝素衍生物具有抑制肿瘤细胞和脐静脉内皮细胞增殖的活性。

公开(公告)号：CN102888391A

公开(公告)日：2013-01-23

申请号：CN201210423324.7

申请日：2012-10-30

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 李锂 ,  白佳珂 ,  马小来 ,  史绍鹏

IPC分类号： C12N11/10

摘要： 本发明涉及一种肝素酶Ⅱ的固定化方法，尤其涉及一种以壳聚糖微球为固定化材料，对肝素酶Ⅱ进行固定化的方法。肝素酶Ⅱ固定化以后具有可回收、可重复利用、酶与底物和产物易分离等优越性。

公开(公告)号：CN102888390A

公开(公告)日：2013-01-23

申请号：CN201210423099.7

申请日：2012-10-30

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 马小来 ,  白佳珂 ,  史绍鹏 ,  李锂

IPC分类号： C12N11/10

摘要： 本发明涉及一种肝素酶Ⅲ的固定化方法，尤其涉及一种以壳聚糖微球为固定化材料，对肝素酶Ⅲ进行固定化的方法。肝素酶Ⅲ固定化以后具有可回收、可重复利用、酶与底物和产物易分离等优越性。

公开(公告)号：CN102277345B

公开(公告)日：2012-11-14

申请号：CN201110241259.1

申请日：2011-08-22

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 马小来 ,  史绍鹏 ,  李锂

IPC分类号： C12N9/88 ,  C12R1/20

摘要： 本发明提供了一种肝素黄杆菌软骨素酶B和软骨素酶AC的制备方法，以肝素黄杆菌为原料，将肝素黄杆菌接到种子培养基中培养、再接到发酵培养基发酵、离心收集沉淀、沉淀超声破碎、离心得到肝素黄杆菌软骨素酶B和软骨素酶AC的粗酶液，先将粗酶液通过一次硫酸铵沉淀去除部分杂质，然后通过OCTYL-Sepharose FF层析分离为酶B和酶AC两部分，再将酶B和酶AC分别各过三次SP-Sepharose FF纯化，得到高纯度的软骨素酶B和软骨素酶AC。

公开(公告)号：CN102586217A

公开(公告)日：2012-07-18

申请号：CN201210046751.8

申请日：2012-02-28

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 马小来 ,  史绍鹏 ,  李锂

IPC分类号： C12N9/96

摘要： 本发明涉及一种肝素酶I、II、III的冻干保存方法，尤其涉及一种由任选的氯化钙和海藻糖组成的保护剂，用于冻干过程中肝素酶I、II、III的活性保护。在保护剂作用下，维持了较高的活性。这样制得的酶冻干粉便于储存、运输、使用，提高了应用价值。

公开(公告)号：CN106932494A

公开(公告)日：2017-07-07

申请号：CN201511009252.1

申请日：2015-12-30

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 马小来 ,  李浩杰 ,  张紫恒 ,  李锂

IPC分类号： G01N30/02

CPC分类号： G01N30/02 ,  G01N2030/027

摘要： 本发明公开了一种酶解-HPLC法检测舒洛地特的方法，所述方法包括下述步骤：a、舒洛地特的完全酶解：向舒洛地特溶液中，加入酶I、酶II、酶III的混合酶溶液，室温酶解；b、HPLC法分析：取降解产物做SAX-HPLC分析；c、二糖单元种类和含量的计算：根据现有的8个标准肝素双糖的洗脱时间，确定供试品肝素二糖单元的种类和含量，计算各双糖所占百分含量。

公开(公告)号：CN105504097A

公开(公告)日：2016-04-20

申请号：CN201511025299.7

申请日：2015-12-30

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 李锂 ,  马小来 ,  田方方 ,  杜媛媛 ,  杜宏银 ,  刘亚晗

IPC分类号： C08B37/10 ,  C12P19/26 ,  A61K31/727 ,  A61P35/00

CPC分类号： C08B37/0078 ,  A61K31/727 ,  C12P19/00 ,  C12P19/26

摘要： 本发明提供了一种硫酸化肝素寡糖及其制备方法和应用，其特征在于，所述硫酸化肝素寡糖分子的非还原端含有由肝素酶酶解产生的不饱和双键，含有糖醛酸衍生物和糖胺衍生物，其具有式I所示结构，其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、Ra、Rb、Rc和Rd独立地为SO3-或H；Rx'、Ry'和Rz'独立地为COCH3或SO3-，n为1-3。通过本发明的制备方法制备得到硫酸化程度可控的硫酸化寡糖，该硫酸化肝素寡糖的体外抑制乙酰肝素酶活性很高，其抑制细胞粘附和迁移的活性高出肝素4-5倍，小鼠体内抗肿瘤转移的活性也比肝素高2-3倍，具有较好的抗肿瘤转移效果和较高的特异性。

公开(公告)号：CN104017102B

公开(公告)日：2016-02-24

申请号：CN201410274835.6

申请日：2014-06-19

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 马小来 ,  李锂 ,  张锦 ,  黄洪

IPC分类号： C08B37/00

摘要： 本发明公开了一种从肝素副产物分离制备舒洛地特原料的方法，将肝素副产物溶解，以氢氧化钠调节溶液至高pH值，以适量乙醇做低温沉淀，去沉淀后得到硫酸多糖溶液；以盐酸调该硫酸多糖溶液至低pH值，以适量乙醇做低温沉淀，去沉淀后得到硫酸多糖溶液；再以氢氧化钠调节该溶液至pH中性，以适量乙醇做室温沉淀，取沉淀烘干得到制得的舒洛地特原料。本发明的工艺简单、成本低、容易放大、适于工业化生产。