公开(公告)号：CN104017796A

公开(公告)日：2014-09-03

申请号：CN201410274912.8

申请日：2014-06-19

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 杜宏银 ,  马小来 ,  李锂

IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N1/21

CPC分类号： C12N9/2402 ,  C12Y302/01019

摘要： 本发明公开了一种肝素酶Ⅱ缺失突变体蛋白及其编码基因。本发明提供的肝素酶Ⅱ缺失突变体蛋白，其氨基酸序列如SEQ IDNO:2.所示,本发明的蛋白的编码基因也在保护范围之内。本发明首次通过PCR技术设计引物使得肝素酶Ⅱ缺失C端氨基酸序列，获得分子量更小，比活性较高的肝素酶Ⅱ，经过纯化后比活可达43.3IU/mg，本发明可广泛用于生产肝素酶Ⅱ缺失突变体。

公开(公告)号：CN104017102A

公开(公告)日：2014-09-03

申请号：CN201410274835.6

申请日：2014-06-19

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 马小来 ,  李锂 ,  张锦 ,  黄洪

IPC分类号： C08B37/00

摘要： 本发明公开了一种从肝素副产物分离制备舒洛地特原料的方法，将肝素副产物溶解，以氢氧化钠调节溶液至高pH值，以适量乙醇做低温沉淀，去沉淀后得到硫酸多糖溶液；以盐酸调该硫酸多糖溶液至低pH值，以适量乙醇做低温沉淀，去沉淀后得到硫酸多糖溶液；再以氢氧化钠调节该溶液至pH中性，以适量乙醇做室温沉淀，取沉淀烘干得到制得的舒洛地特原料。本发明的工艺简单、成本低、容易放大、适于工业化生产。

公开(公告)号：CN101885782B

公开(公告)日：2012-07-04

申请号：CN200910039361.6

申请日：2009-05-11

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 李坦 ,  马小来 ,  李锂

IPC分类号： C08B37/00

摘要： 本发明公开了一种从肝素副产物纯化硫酸皮肤素的方法，本发明以肝素副产物为原料，溶解后加入醋酸钾，以醋酸调节溶液的pH值产生沉淀，清液为硫酸多糖溶液，向硫酸多糖溶液加入斑氏试剂、饱和氢氧化钠溶液，离心收集沉淀，重沉淀，再将沉淀溶解，以阴离子交换性质的层析柱、氯化钠溶液洗去铜离子，再以氯化钠溶液线性梯度洗脱，收集洗脱液，将洗脱液蒸发浓缩以乙醇沉淀得到高纯度的硫酸皮肤素。本发明的纯化工艺简单、纯化收率高、成本低、容易放大、适于工业化生产。

公开(公告)号：CN101885782A

公开(公告)日：2010-11-17

申请号：CN200910039361.6

申请日：2009-05-11

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 李坦 ,  马小来 ,  李锂

IPC分类号： C08B37/00

摘要： 本发明公开了一种从肝素副产物纯化硫酸皮肤素的方法，本发明以肝素副产物为原料，溶解后加入醋酸钾，以醋酸调节溶液的pH值产生沉淀，清液为硫酸多糖溶液，向硫酸多糖溶液加入斑氏试剂、饱和氢氧化钠溶液，离心收集沉淀，重沉淀，再将沉淀溶解，以阴离子交换性质的层析柱、氯化钠溶液洗去铜离子，再以氯化钠溶液线性梯度洗脱，收集洗脱液，将洗脱液蒸发浓缩以乙醇沉淀得到高纯度的硫酸皮肤素。本发明的纯化工艺简单、纯化收率高、成本低、容易放大，适于工业化生产。

公开(公告)号：CN104774279A

公开(公告)日：2015-07-15

申请号：CN201510135193.6

申请日：2015-03-26

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 马小来 ,  李锂 ,  白佳珂 ,  张紫恒

IPC分类号： C08B37/10 ,  C12P19/26 ,  A61P7/02

摘要： 本发明公开了一种新型超低分子肝素，使用从Sphingobacterium daejeonense细菌中得到的肝素酶SDhepⅡ，降解肝素、超滤分离、乙醇沉淀等步骤最终得到。这种超低分子肝素在抗凝血方面具有特异性，有望成为临床抗凝血药物的活性组分。

公开(公告)号：CN104630197A

公开(公告)日：2015-05-20

申请号：CN201510040524.8

申请日：2015-01-28

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 白佳珂 ,  张紫恒 ,  曲海薇 ,  马小来 ,  李锂

IPC分类号： C12N9/88 ,  C12Q1/527 ,  C12R1/01

CPC分类号： C12N9/88 ,  C12P19/26 ,  C12Q1/527 ,  C12Y402/02007

摘要： 本发明公开了从脑膜脓毒性金黄杆菌(Chryseobacterium meningosepticum)细菌中得到新型肝素酶CMhep，为未经过报道的新型肝素酶。酶的获得是通过将筛选得到的细菌发酵培养、粗酶提取、多步柱层析等步骤最终得到。性质研究表明该酶在酶解肝素方面具有特异性，有望用于低分子肝素制备或肝素类质量检测方面。

公开(公告)号：CN104073480A

公开(公告)日：2014-10-01

申请号：CN201410316391.8

申请日：2014-07-04

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 杜宏银 ,  马小来 ,  李锂

IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

CPC分类号： C12N9/88 ,  C12Y402/02007

摘要： 本发明公开了一种易固定化肝素酶I蛋白及其编码基因。该蛋白可被几丁质高效率固定化；本发明提供的易固定化肝素酶I蛋白，其氨基酸序列如SEQ IDNO:2.所示,本发明的蛋白的编码基因也在保护范围之内。本发明通过重叠延伸PCR技术设计肝素酶I基因和几丁质结合域融合表达可固定化的肝素酶I。

公开(公告)号：CN102988434A

公开(公告)日：2013-03-27

申请号：CN201210492425.X

申请日：2012-11-28

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 刘敏敏 ,  马小来 ,  李锂

IPC分类号： A61K36/23 ,  A61K47/34 ,  A61K9/06 ,  A61P17/02

摘要： 本发明涉及一种积雪草有效提取物聚乙二醇（polyethyleneglycol，PEG）软膏剂及其制备方法。该软膏剂含有以下重量百分比的组分：0.1%～10%的积雪草有效提取物，0%～10%的渗透促进剂，80%～99.9%的聚乙二醇（PEG）软膏基质；该软膏剂的制备方法是：将积雪草有效提取物、渗透促进剂和聚乙二醇（PEG）软膏基质混合，60～80℃加热溶解至澄明后停止加热，搅拌均匀至冷凝即得；本发明的积雪草有效提取物聚乙二醇（PEG）软膏剂透皮效果好，顺应性强，处方和制备工艺简单，容易放大，适合工业化生产；临床上用于皮肤外伤、手术创伤、溃疡、烧烫伤、瘢痕疙瘩及硬皮病等皮肤病症的治疗。

公开(公告)号：CN102796723A

公开(公告)日：2012-11-28

申请号：CN201210332940.1

申请日：2012-09-11

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 白佳珂 ,  史绍鹏 ,  马小来 ,  李锂

IPC分类号： C12N11/10 ,  C12N11/04

摘要： 本发明涉及一种肝素酶I的固定化方法，尤其涉及一种以壳聚糖微球为固定化材料，对肝素酶I进行固定化的方法。肝素酶I固定化以后具有可回收，可重复利用，酶与底物和产物易分离，稳定性增强等优越性。

公开(公告)号：CN101886067B

公开(公告)日：2012-03-07

申请号：CN200910039360.1

申请日：2009-05-11

申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司

发明人： 马小来 ,  李锂 ,  李坦

IPC分类号： C12N9/88 ,  C12R1/20

摘要： 本发明提供了一种肝素酶I的制备方法，以肝素黄杆菌为原料，将肝素黄杆菌接到种子培养基中培养、再接到发酵培养基、离心收集沉淀、沉淀超声破碎、再离心而得到肝素黄杆菌肝素酶I的粗酶液，通过对粗酶液进行三次SP-Sepharose FF层析纯化得到高纯度的肝素黄杆菌肝素酶I。其中三次SP-Sepharo se FF层析纯化都由氯化钙全程保护，大大增加了纯酶活性收率。本发明具有工艺简单、容易放大、产品单次制备量大、试剂成本低等特点，制备的肝素酶I比活高达223IU/mg，纯酶活性收率高达30％，与现有最新方法相比，比活增加了两倍多，纯化收率增加将近一倍。