公开(公告)号：CN115029404A

公开(公告)日：2022-09-09

申请号：CN202110239767.X

申请日：2021-03-04

申请人： 珠海联邦制药股份有限公司

发明人： 梁雄基 ,  曹春来 ,  黄国周 ,  刘合栋 ,  李张万金 ,  杨晓纯 ,  樊昌 ,  周翠 ,  何秀仪 ,  李素雯 ,  梁芷瑜

IPC分类号： C12P21/02 ,  C12N1/38 ,  C12N15/70 ,  C12N15/62 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种用于LPP单基因敲除或突变的大肠杆菌高效分泌表达短肽类蛋白的发酵培养基及应用。该发酵培养基包括：柠檬酸2.55‑3.4g/L、七水硫酸镁3.5‑4.5g/L、有机氮源15‑36g/L、甘油4.5‑5.5g/L、无水磷酸二氢钾13‑14g/L、无水磷酸氢二铵8‑9g/L、维生素B1 4‑5mg/L，微量元素0.8‑1.2mL/L。该发酵培养基克服了突变菌株的生长缺陷，使得菌株能够更好的生长，生长速率达到野生菌水平，实现高密度培养；能显著促进短肽类蛋白的分泌表达，诱导后菌株密度稳定持续增长，发酵周期达40小时，发酵培养基中的目的蛋白得到持续累积。

公开(公告)号：CN114686504A

公开(公告)日：2022-07-01

申请号：CN202011620414.6

申请日：2020-12-30

申请人： 珠海联邦制药股份有限公司

发明人： 黄国周 ,  刘合栋 ,  曹春来 ,  梁雄基 ,  杨晓纯 ,  李张万金 ,  樊昌 ,  李素雯 ,  周翠 ,  何秀仪

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N15/62 ,  C12P21/02 ,  C07K19/00

摘要： 本发明公开了Lpp或其突变体作为分子伴侣在大肠杆菌中分泌表达重组蛋白的应用。本发明发明人意外发现Lpp作为目的蛋白的分子伴侣，有利于包含分子伴侣和目的蛋白的重组蛋白的分泌表达，产量高，且对大肠杆菌菌体生长的影响小，无显著的菌体裂解情况，易于实现高密度发酵，便于工业化生产。通过该应用，本发明还提供了一种用于大肠杆菌分泌表达的融合蛋白以及一种大肠杆菌分泌表达融合蛋白的方法。

公开(公告)号：CN113201074A

公开(公告)日：2021-08-03

申请号：CN202110494341.9

申请日：2021-05-07

申请人： 珠海联邦制药股份有限公司

发明人： 杨晓纯 ,  曹春来 ,  刘合栋 ,  李素雯 ,  李张万金 ,  梁雄基 ,  樊昌 ,  梁芷瑜 ,  周翠 ,  何秀仪 ,  黄国周 ,  郭凤羽 ,  张鹏

IPC分类号： C07K19/00 ,  C07K5/117 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A61K38/07 ,  A61P17/00 ,  A61P17/16 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种PKEK融合蛋白及制备方法与应用。该PKEK融合蛋白的结构式如下：(PKEK‑B)n；B为柔性连接肽；n为1～30的整数。将该融合蛋白以包涵体蛋白的形式表达，同时通过将若干美白多肽PKEK与柔性连接肽依次串联构成融合蛋白，能够有效减少酶切过程中产生的错切杂质，进而高效获得高纯度美白多肽PKEK，且纯度可达95.4％；另外，利用本发明所述基因工程技术生产美白多肽PEKE的制备方法，在12h内即可大量获得PKEK融合蛋白包涵体，且表达量最高可达45g/L，工艺简单高效且易于放大，有利于工业化生产。