公开(公告)号：CN116515892A

公开(公告)日：2023-08-01

申请号：CN202310679807.1

申请日：2023-06-09

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张昌伟 ,  吕善武 ,  袁梦果 ,  侯喜林 ,  刘同坤 ,  李英 ,  肖栋 ,  胡春梅 ,  王建军

IPC: C12N15/82 ,  A01H6/20 ,  A01H5/00

Abstract: 本发明公开了网格轻链蛋白在抑制TuMV侵染不结球白菜中的应用。本发明通过获得BcCLC1、BcCLC2病毒诱导的基因沉默（VIGS）诱导的沉默植株，结果表明VIGS诱导的基因沉默后，不结球白菜中BcCLC1、BcCLC2基因的相对表达水平明显下降，沉默植株接种TuMV后发现植株中病毒RNA的积累量均明显低于对照植株，这说明BcCLC1、BcCLC2基因沉默抑制TuMV的侵染，在不结球白菜抗TuMV育种具有应用前景。

公开(公告)号：CN115747370A

公开(公告)日：2023-03-07

申请号：CN202211417240.2

申请日：2022-11-14

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张昌伟 ,  李琳 ,  肖栋 ,  侯喜林 ,  刘同坤 ,  李英 ,  胡春梅 ,  王建军

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一组不结球白菜的KASP分子标记及其在种质资源鉴定中的应用。所述KASP分子标记基于不结球白菜基因组和重测序KASP技术，开发了一组不结球白菜的KASP引物，根据所开发的SNP位点以及设计的引物可以构建所选群体的DNA指纹图谱、品种鉴定、以及种子纯度鉴定等实验，实现对不结球白菜种质资源和种子纯度的快速、准确、有效地鉴定。

公开(公告)号：CN109652455B

公开(公告)日：2022-09-23

申请号：CN201910121665.0

申请日：2019-02-19

Applicant: 南京农业大学 ,  南京市蔬菜科学研究所

Inventor： 张昌伟 ,  许可翠 ,  侯喜林 ,  孙菲菲 ,  肖栋 ,  刘同坤 ,  李英 ,  胡春梅

IPC: C12N15/87

Abstract: 为解决不结球白菜再生率低，受基因型影响大，使得转化效率低的技术问题，本发明提供一种磁性纳米载体介导的不结球白菜高效遗传转化方法，包括将含有外源基因的质粒与具有顺磁性、表面覆盖一层PEI薄膜的Fe3O4的磁性纳米载体以质量比1：1连接，得到基因—磁性纳米载体复合物；在花粉培养基中混合基因—磁性纳米载体与待转化植物花粉，在0.1～0.5T的磁场介导下进行磁转化，直接递送基因—磁性纳米载体复合物进入花粉细胞；然后通过植物授粉和受精过程实现待转化植物的外源基因遗传转化。本发明花粉培养基配方、磁性纳米粒子和质粒DNA的质量比、磁转化时间三者的组合，能够保证不结球白菜的花粉活力并有效提高磁转化效率，建立简单高效的遗传转化体系。

公开(公告)号：CN113564201A

公开(公告)日：2021-10-29

申请号：CN202110886126.3

申请日：2021-08-03

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张昌伟 ,  杨宇 ,  肖栋 ,  任一鸣 ,  刘同坤 ,  侯喜林 ,  李英 ,  胡春梅 ,  王建军

IPC: C12N15/82 ,  A01H5/10 ,  A01H6/20

Abstract: 本发明公开了一种十字花科作物花粉电击遗传转化方法，以不结球白菜的成熟花粉细胞作为受体材料，把质粒DNA在电场的作用下，导入花粉中，结合常规的人工授粉，得到转基因种子。通过对电转染花粉的培养观察，以及获得的后代植株进行转基因检测，证明电击转化法可以成功的在不结球白菜上应用。本发明首次在不结球白菜上应用电击转化技术作为基因编辑的方法，与目前农杆菌转化，基因枪法等转基因方法相比，操作相对简洁，成本较低，可以进一步研究建立遗传转化体系，为不结球白菜的遗传育种提供更好的工具。

公开(公告)号：CN111543307A

公开(公告)日：2020-08-18

申请号：CN202010381924.6

申请日：2020-05-08

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张昌伟 ,  侯忠乐 ,  高立伟 ,  侯喜林 ,  任一鸣 ,  肖栋 ,  刘同坤 ,  李英 ,  胡春梅

IPC: A01H1/00 ,  A01H6/20 ,  A01H5/12 ,  C12N15/82 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种白菜或青花菜CRISPR-Cas9基因编辑体系基因编辑效率的鉴定方法。该方法包含以下步骤:(1)利用聚乙烯亚胺修饰的碳纳米管介导的叶片瞬时转化法将CRISPR-Cas9基因编辑载体转化白菜或青花菜叶片；(2)注射后的第三天观察叶片GFP荧光蛋白的表达情况,提取有GFP荧光表达的叶片部位的基因组DNA，扩增编辑位点附近的序列测序验证编辑位点附近是否发生基因编辑,从而鉴定CRISPR-Cas9基因编辑体系的基因编辑效率。本方法解决了白菜和青花菜难以通过农杆菌侵染实现瞬时转化的问题，本发明简单有效地实现了白菜和青花菜的基因编辑，具有实验周期短，转化效率高的优点。

公开(公告)号：CN108034753A

公开(公告)日：2018-05-15

申请号：CN201810035647.6

申请日：2018-01-15

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 肖栋 ,  刘东让 ,  侯喜林 ,  李英 ,  张昌伟 ,  刘同坤 ,  王建军 ,  胡春梅

IPC: C12Q1/6895 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明提供了一种与不结球白菜开花时间紧密连锁的SNP分子标记，所述SNP分子标记位于如SEQ ID NO.1所示BrFLC1_A10基因的第58个碱基，所述碱基为A或C，SNP分子标记的基因型为A/A时，不结球白菜为早开花型；SNP分子标记的基因型为C/C时，不结球白菜为晚开花型。本发明还提供用于检测与不结球白菜开花时间紧密连锁的SNP分子标记的特异性引物对，同时提供不结球白菜开花时间紧密连锁的SNP分子标记在鉴定不结球白菜开花时间以及在不结球白菜辅助育种中的应用。还提供用于检测与不结球白菜开花时间紧密连锁的SNP分子标记的特异性引物对在鉴定不结球白菜开花时间中以及在不结球白菜辅助育种中的应用。