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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113549617A
公开(公告)日：2021-10-26
申请号：CN202110618334.5
申请日：2021-06-03
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开编辑不结球白菜CENH3基因的sgRNA及其CRISPR/Cas9载体和应用，本发明设计了不结球白菜CENH3基因的sg RNA，构建CRISPR/Cas9基因编辑载体，将连接了目的DNA片段的CRISPR/Cas9载体转入不结球白菜基因组中，通过基因编辑实现对不结球白菜CENH3基因的定点突变。本发明使用花粉纳米磁转化技术结合CRISPR/Cas9技术对不结球白菜内源基因CENH3进行编辑，通过植株抗性筛选、PCR检测、基因测序筛选得到CENH3单倍体诱导系，为在不结球白菜双单倍体育种中利用CENH3介导的染色体消除机制获得单倍体奠定基础。
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公开(公告)号：CN113549617B
公开(公告)日：2023-06-30
申请号：CN202110618334.5
申请日：2021-06-03
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开编辑不结球白菜CENH3基因的sgRNA及其CRISPR/Cas9载体和应用，本发明设计了不结球白菜CENH3基因的sg RNA，构建CRISPR/Cas9基因编辑载体，将连接了目的DNA片段的CRISPR/Cas9载体转入不结球白菜基因组中，通过基因编辑实现对不结球白菜CENH3基因的定点突变。本发明使用花粉纳米磁转化技术结合CRISPR/Cas9技术对不结球白菜内源基因CENH3进行编辑，通过植株抗性筛选、PCR检测、基因测序筛选得到CENH3单倍体诱导系，为在不结球白菜双单倍体育种中利用CENH3介导的染色体消除机制获得单倍体奠定基础。
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公开(公告)号：CN113564201B
公开(公告)日：2024-06-07
申请号：CN202110886126.3
申请日：2021-08-03
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种十字花科作物花粉电击遗传转化方法，以不结球白菜的成熟花粉细胞作为受体材料，把质粒DNA在电场的作用下，导入花粉中，结合常规的人工授粉，得到转基因种子。通过对电转染花粉的培养观察，以及获得的后代植株进行转基因检测，证明电击转化法可以成功的在不结球白菜上应用。本发明首次在不结球白菜上应用电击转化技术作为基因编辑的方法，与目前农杆菌转化，基因枪法等转基因方法相比，操作相对简洁，成本较低，可以进一步研究建立遗传转化体系，为不结球白菜的遗传育种提供更好的工具。
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公开(公告)号：CN113564201A
公开(公告)日：2021-10-29
申请号：CN202110886126.3
申请日：2021-08-03
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种十字花科作物花粉电击遗传转化方法，以不结球白菜的成熟花粉细胞作为受体材料，把质粒DNA在电场的作用下，导入花粉中，结合常规的人工授粉，得到转基因种子。通过对电转染花粉的培养观察，以及获得的后代植株进行转基因检测，证明电击转化法可以成功的在不结球白菜上应用。本发明首次在不结球白菜上应用电击转化技术作为基因编辑的方法，与目前农杆菌转化，基因枪法等转基因方法相比，操作相对简洁，成本较低，可以进一步研究建立遗传转化体系，为不结球白菜的遗传育种提供更好的工具。
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公开(公告)号：CN111543307A
公开(公告)日：2020-08-18
申请号：CN202010381924.6
申请日：2020-05-08
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种白菜或青花菜CRISPR-Cas9基因编辑体系基因编辑效率的鉴定方法。该方法包含以下步骤:(1)利用聚乙烯亚胺修饰的碳纳米管介导的叶片瞬时转化法将CRISPR-Cas9基因编辑载体转化白菜或青花菜叶片；(2)注射后的第三天观察叶片GFP荧光蛋白的表达情况,提取有GFP荧光表达的叶片部位的基因组DNA，扩增编辑位点附近的序列测序验证编辑位点附近是否发生基因编辑,从而鉴定CRISPR-Cas9基因编辑体系的基因编辑效率。本方法解决了白菜和青花菜难以通过农杆菌侵染实现瞬时转化的问题，本发明简单有效地实现了白菜和青花菜的基因编辑，具有实验周期短，转化效率高的优点。
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