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公开(公告)号：CN111088277A
公开(公告)日：2020-05-01
申请号：CN201911411234.4
申请日：2019-12-31
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9 SunTag系统抑制双生病毒侵染的载体及其构建和应用，该方法利用搭载甲基转移酶DRM2的CRISPR/dCas9 Sun Tag系统，构建针对TYLCCNV和TYLCCNB特定区域的sgRNA，从而使得TYLCCNV和TYLCCNB特定区域被DRM2识别并被甲基化。为了增强识别和甲基化的效果，分别设计了三个sgRNA(g16/g17/g9A)靶标TYLCCNV和三个sgRNA(g1/g14/g9B)靶标TYLCCNB的甲基化敏感区域，并将三个sgRNA依次插入pEG302载体，从而得到可以定点靶标并进行甲基化修饰TYLCCNV的pEG302-A和定点靶标并进行甲基化修饰TYLCCNB的pEG302-β的抑制双生病毒侵染的载体。
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公开(公告)号：CN111041043A
公开(公告)日：2020-04-21
申请号：CN201911411237.8
申请日：2019-12-31
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
IPC: C12N15/82 , C12N15/113 , C12N15/66 , A01H5/00 , A01H6/82
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9编辑本氏烟基因的载体及其构建方法和应用，包括针对本氏烟UbEF1B基因构建的BKG-g10、BKG-g11载体和/或针对本氏烟CCR4/NOT基因构建的BKG-g12、BKG-g13载体。上述载体将UbEF1B基因或CCR4/NOT基因编辑后本氏烟生长状态正常，表型相较于野生型未发生明显变化；不会对其性状产生影响，利于后代的延续。依靠CRISPR/Cas9系统编辑本氏烟内源基因相较于传统的育种方法能更快更有效的获得抗病材料。
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公开(公告)号：CN119662725A
公开(公告)日：2025-03-21
申请号：CN202411916612.5
申请日：2024-12-24
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
IPC: C12N15/84 , C12N15/113 , C12N15/12 , A01H5/00 , A01H6/82
Abstract: 本发明公开了一种兼抗烟粉虱和番茄黄曲叶病毒的RNAi重组载体及构建方法和应用，将在韧皮部表达的双生病毒伴随的DNAβ启动子构建到RNAi载体pCambia1391载体上，获得1391::DNAβpro载体骨架，用RT‑PCR的方法扩增烟粉虱关键基因BtACTB部分片段、TYLCV关键区段(含病毒复制起始的基因间隔区、部分外壳蛋白和复制相关蛋白)及其反向重复序列，构建一种由韧皮部启动子驱动，并同时靶向烟粉虱和番茄黄曲叶病毒关键序列的反向发夹结构的重组载体。并通过农杆菌转化的方法，将构建的重组载体导入番茄中，通过筛选得到了降低烟粉虱存活率及抑制TYLCV侵染的番茄植株。
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公开(公告)号：CN119530283A
公开(公告)日：2025-02-28
申请号：CN202411763419.2
申请日：2024-12-03
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
Abstract: 本发明公开了一种PUB62基因在调控植物抗双生病毒中的应用及转基因植物培育方法，所述双生病毒为大豆黄化曲叶病毒、番茄黄化曲叶病毒和云南番茄曲叶病毒。本发明通过克隆本氏烟PUB62基因，将其构建为带有黄色荧光蛋白的NbPUB62‑YFP载体，通过农杆菌介导的转化方法，将NbPUB62‑YFP载体导入植物细胞，通过细胞和组织培养技术，获得NbPUB62过表达转基因植物，该NbPUB62过表达转基因植物能够显著抑制大豆黄化曲叶病毒的侵染，同时也能显著抑制番茄黄化曲叶病毒、云南番茄曲叶病毒的侵染。
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公开(公告)号：CN119506333A
公开(公告)日：2025-02-25
申请号：CN202411499782.8
申请日：2024-10-25
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
Abstract: 本发明公开了GMPS基因在调控植物生长发育与抗双生病毒中的应用及转基因植物培育方法，其中，所述GMPS基因序列如SEQ ID NO:1所示，所述双生病毒为TYLCV、TYLCCNV和TbCSV。本发明通过农杆菌转化的方法，将携带目的基因片段的RNAi基因表达干扰载体导入目的植物中，获得了GMPS基因敲低的植株，该基因敲低后代植株生长发育优于野生型材料，并且能够显著减轻TYLCV、TYLCCNV和TbCSV的侵染，具有促进植物生长以及广谱抗双生病毒的效果。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118345114B
公开(公告)日：2024-12-31
申请号：CN202410464277.3
申请日：2024-04-17
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
Abstract: 本发明公开了一种瓜蒌斑驳花叶病毒诱导的基因沉默载体及构建方法和应用，将瓜蒌斑驳花叶病毒侵染性克隆载体引入单一多克隆位点，获得pCB301‑TrMMV‑MCS基因沉默载体骨架，用RT‑PCR的方法克隆本氏烟和葫芦科植物内源基因片段，并插入到pCB301‑TrMMV‑MCS的多克隆位点从而获得基因沉默载体，该载体通过农杆菌注射接种并摩擦转接的方法诱导本氏烟内源基因的良好沉默，且沉默表型能够持续到花萼。该基因沉默载体能够诱导包括西葫芦、黄瓜和甜瓜等葫芦科植物的基因沉默；在甜瓜中展现良好的沉默效果，能够引起甜瓜花明显的基因沉默表型。本发明的基因沉默载体为葫芦科等植物基因功能研究提供了有效的工具。
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公开(公告)号：CN118879773A
公开(公告)日：2024-11-01
申请号：CN202410953376.8
申请日：2024-07-16
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
Abstract: 本发明公开了一种芜菁花叶病毒P1蛋白插入标签的方法及其重组载体和应用，通过在TuMV侵染性克隆pCambia2300‑TuMV P1的N端插入Flag‑4×Myc标签和青色荧光蛋白CFP标签，使其能表达出具有标签的Flag‑4×Myc‑P1蛋白和青色荧光的CFP‑P1蛋白。本发明方法构建的重组载体pCambia2300‑TuMV‑Flag‑4×Myc‑P1和pCambia2300‑TuMV‑CFP‑P1具有以下优势：1)插入标签的TuMV仍能系统侵染；2)融合的青色荧光CFP标签可以更清楚的观察在病毒侵染下的P1的真实的亚细胞定位以及P1与融合荧光标签的寄主因子在植物细胞中的共同定位；3)鉴于P1是TuMV重要的功能蛋白，融合标签表达后的蛋白可利用标签抗体进行免疫共沉淀，筛选出与P1互作的寄主蛋白。
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公开(公告)号：CN118109422A
公开(公告)日：2024-05-31
申请号：CN202410352660.X
申请日：2024-03-26
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
Abstract: 本发明公开了一种西瓜花叶病毒WMV及侵染性克隆载体、构建方法和应用，所述西瓜花叶病毒WMV的全基因组序列如SEQ ID NO：1所示。该病毒的侵染性克隆载体是由西瓜花叶病毒WMV全基因组序列构建到pCB301载体而得，命名为pCB301‑WMV载体；所述pCB301载体中含有35S启动子和核酸酶Rz。该侵染性克隆载体具有稳定的侵染性，在西瓜、黄瓜、甜瓜和西葫芦上能够稳定侵染，并且积累病毒的RNA；该载体不会造成这些瓜类植物生长发育的严重表型，以后可以对载体加以改造利用、能用于外源蛋白表达。
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公开(公告)号：CN114317460B
公开(公告)日：2023-10-13
申请号：CN202210023201.8
申请日：2022-01-10
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
Abstract: 本发明公开了瓜蒌斑驳花叶病毒及其侵染性克隆载体、构建方法和应用，所述瓜蒌斑驳花叶病毒的微生物保藏编号为CGMCC NO：21930，其序列如SEQ ID NO:15所示。该病毒的侵染性克隆载体由瓜蒌斑驳花叶病毒的全序列融合到带35S启动子和核酶Rz的载体pCB301制备得到。通过农杆菌介导转化后在寄主体内转录、复制、侵染，以用于病毒的功能基因组研究。本发明为研究该病毒的基因组结构和功能以及病毒与寄主之间的相互作用提供了成熟的体系。
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公开(公告)号：CN114015718B
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202111399865.6
申请日：2021-11-24
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
Abstract: 本发明公开了一种大豆黄曲叶病毒侵染性克隆载体及其构建方法和应用，具体是在获得大豆黄曲叶病毒基因组全序列的基础上，通过基因重组的方法将两个正向重复的大豆黄曲叶病毒基因组构建到双元表达载体pBinPLUS上，重组载体通过电击转化到农杆菌菌株EHA105中，获得的病毒载体能够成功侵染大豆、本氏烟等植物。本发明为研究该病毒基因组结构和功能及病毒与寄主之间的相互作用研究提供了成熟的体系。
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