公开(公告)号：CN102586457A

公开(公告)日：2012-07-18

申请号：CN201210067143.5

申请日：2012-03-14

申请人： 东华大学

发明人： 李凯 ,  谢雯 ,  鲍世民 ,  谢建云 ,  姜宪环 ,  蔡慧强

IPC分类号： C12Q1/68

摘要： 本发明涉及一种用于鉴别近交系小鼠的SNP分型方法，包括：(1)遗传标记的选择，平均覆盖21染色体的共45个SNP位点，并对这些位点设计引物和探针；(2)四组多重PCR，每组含10～12对PCR引物；(3)四组多重LDR，每组含10～12个位点特异性探针；(4)产物快速分离鉴定。本发明的SNP分型方案，仅需要45个SNP遗传位标就可用于近交系小鼠的分型和鉴定，不仅能减少反应次数和时间，而且操作简便迅速，能大大节约成本，对其分型和研究具有重要意义，为近交系小鼠的鉴定和分型提供了一种新的方法。

公开(公告)号：CN101250586A

公开(公告)日：2008-08-27

申请号：CN200810034461.5

申请日：2008-03-11

申请人： 东华大学

发明人： 于明辉 ,  王剑晖 ,  范忠鹏 ,  李凯 ,  陆炯 ,  肖君华

IPC分类号： C12Q1/68

摘要： 本发明涉及一种微量DNA检测的方法，一种通过利用乙醇沉淀回收PCR扩增后的原始DNA模板来重复利用，以克服模板不足的方法，可用于法医学、古生物学、产前诊断遗传学检测与疾病基因组学的研究等这些DNA样本比较少的领域。与以往检测微量DNA的方法相比，本发明从起始模板的角度来解决微量DNA的检测，且整个检测方案操作过程简单，不需要专业人员，特异性高，并且灵敏度与PCR效率都很高，在实际应用中有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN101078028A

公开(公告)日：2007-11-28

申请号：CN200710038929.3

申请日：2007-03-30

申请人： 东华大学

发明人： 贺明星 ,  李凯 ,  肖君华 ,  周宇荀

IPC分类号： C12Q1/68

摘要： 本发明涉及一种两次bio－bar－code核酸检测技术，步骤包括：(1)磁珠探针、待测DNA和第一组纳米金探针混合，杂交；(2)分离磁珠，洗涤，加洗脱液，继续保温杂交，磁分离，洗涤；(3)重新悬浮沉淀，加入第二组纳米金探针，混合，杂交；(4)分离磁珠，洗涤，加洗脱液，去磁珠，检测上清液。该方法操作简单，特异性和灵敏度较高，易于自动化，有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN114703212B

公开(公告)日：2024-03-29

申请号：CN202210194874.X

申请日：2022-03-01

申请人： 东华大学

发明人： 周宇荀 ,  李晓彤 ,  肖君华 ,  李凯

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N15/10 ,  C12N9/02 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种运用特定区段随机突变法改造漆酶的方法及漆酶菌株lac123。本发明通过分析，选定LAC1第二结构域和第三结构域靠近漆酶活性位点附近的重要功能区段作为靶标序列，在对该序列DNA进行化学合成时，采用简并引物法在特定的若干个碱基位点引入随机突变，并将合成好的随机片段通过同源重组的方法，对野生酶的相同片段进行替换，构建包含特异区段特定位点DNA序列的随机突变库，通过二代测序对库容量进行检测，并对随机突变库中的大肠杆菌克隆进行漆酶活性的批量筛选，初筛到了5株酶活有所提升的漆酶，经过摇瓶复筛得到一株酶活提升2.3倍的突变漆酶菌株LAC123，其表达蛋白序列如SEQ ID NO:3所示。

公开(公告)号：CN117385101A

公开(公告)日：2024-01-12

申请号：CN202311421024.X

申请日：2023-10-30

申请人： 东华大学

发明人： 周宇荀 ,  钱丽君 ,  肖君华 ,  李凯

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

摘要： 一种基于连接反应的RNA病毒的多重检测方法，利用连接酶对四种或更多的RNA病毒在同一试管中进行多重连接，该步骤能省略将RNA逆转录成cDNA的过程，在每对探针的5‘端加上通用引物序列，然后可以用通用引物将连接产物进行同时扩增，通过电泳检测扩增产物，以实现RNA病毒的多重检测。针对每个病毒RNA的特异序列设计一对DNA连接探针，利用SplintR连接酶连接与模板RNA互补配对的这一对DNA探针。优化连接探针浓度、退火杂交程序、连接反应温度、连接酶浓度，运用荧光定量PCR和毛细管电泳检测连接产物，建立多重RNA病毒检测方案。

公开(公告)号：CN110643727A

公开(公告)日：2020-01-03

申请号：CN201911018480.3

申请日：2019-10-24

申请人： 东华大学

发明人： 霍欣洋 ,  肖君华 ,  赵阿贵 ,  周宇荀 ,  李凯 ,  王斌

IPC分类号： C12Q1/689 ,  C12Q1/6851 ,  C12Q1/06 ,  C12N15/11 ,  C12R1/35

摘要： 本发明涉及一种双重荧光定量PCR支原体检测试剂盒。该试剂盒包括PCR混合体系，支原体标准质粒和超纯水，该PCR混合体系包括探针定量PCR混合体系，参考基因标准大肠杆菌基因组，支原体引物及探针和参考基因引物及探针。该检测盒可检测20种支原体，检测快速、灵敏度高。

公开(公告)号：CN106544322B

公开(公告)日：2019-10-08

申请号：CN201611108955.4

申请日：2016-12-06

申请人： 东华大学

发明人： 周宇荀 ,  李晓宁 ,  王斯佳 ,  李文文 ,  肖君华 ,  李凯

IPC分类号： C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65

摘要： 本发明涉及一种用于研究Kiss1基因表达调控的报告系统及其构建方法，所述系统为红色荧光蛋白稳定表达，绿色荧光受Kiss1表达调控元件调控的双荧光Kiss1基因表达调控报告系统。构建方法包括：构建红色荧光蛋白打靶载体Ai9‑dtomato；构建绿色荧光蛋白打靶系统；EGFP受Kiss1表达调控元件控制的Cas9‑GT1‑7‑Kiss1‑2A‑EGFP细胞的构建；插入稳定表达的红色荧光背景，即得。本发明实现对研究对象对Kiss1作用效应的量化评估。

公开(公告)号：CN103725759B

公开(公告)日：2017-11-10

申请号：CN201210382385.3

申请日：2012-10-10

申请人： 上海西普尔-必凯实验动物有限公司 ,  东华大学

发明人： 赵莹 ,  肖君华 ,  邢正弘 ,  陈国强 ,  周宇荀 ,  李凯 ,  赵丽亚 ,  晁天柱 ,  柏熊 ,  高捷

IPC分类号： C12Q1/68

摘要： 本发明涉及1号染色体替换野生小家鼠C57BL/6.松江3‑Chr1的建立。构建了一种新的染色体C57BL/6替代实验小鼠品系，该小鼠品系的遗传背景以C57BL/6小鼠为主，但其中1号染色体以松江3小鼠为主。本发明的染色体替换品系可用于研究在相同基因组背景下，由不同的1号染色体基因组带来的性状差异，是采用遗传学方法研究染色体基因组功能的有用工具。

公开(公告)号：CN104894071A

公开(公告)日：2015-09-09

申请号：CN201510311719.1

申请日：2015-06-08

申请人： 东华大学

发明人： 王斯佳 ,  周宇荀 ,  邓倩云 ,  李晓宁 ,  李文文 ,  肖君华 ,  李凯

IPC分类号： C12N5/10 ,  C12N15/63

摘要： 本发明涉及一种对GT1-7细胞进行基因编辑的方法，包括：将GT1-7细胞铺于24孔板中；待细胞贴壁生长，将含有Cas9基因和嘌呤霉素抗性基因的42229质粒转染进入GT1-7细胞系；待细胞表达嘌呤霉素基因，用嘌呤霉素筛选42229转染GT1-7细胞；筛选后，去除含有嘌呤霉素的培养基，更换成正常高糖培养基，并进行扩大培养，待培养板中的GT1-7细胞长满，消化转移到培养瓶中继续扩大培养，即得Cas9稳转GT1-7细胞。本发明在实际应用中只需要转染特定的sgRNA质粒就能对GT1-7细胞靶基因进行精确的基因编辑，避免了Cas9质粒较大对于转染效率的影响，具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN103710372B

公开(公告)日：2015-08-12

申请号：CN201310754411.5

申请日：2013-12-31

申请人： 东华大学

发明人： 周宇荀 ,  马骁骁 ,  肖君华 ,  李凯

IPC分类号： C12N15/66

摘要： 本发明涉及一种用于功能研究的miR-505高表达载体的构建方法，包括：（1）采用PCR方法得到shRNA基因，并用限制性内切酶EcoRI进行酶切，得到经EcoRI酶切后的miR-505片段；（2）将FUGW载体或Fsy载体用EcoRI进行酶切，并CIAP处理使其5’端去磷酸化，然后将处理后的线性化FUGW载体或Fsy载体与经EcoRI酶切后的miR-505片段进行连接，转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α，提取质粒，经PCR和BamHI酶切检测目的基因插入的方向和拷贝数，测序确认后，得到表达载体。本发明的构建方法操作简单，得到的载体可实现miR-505成熟体在哺乳动物细胞中的高表达。